MAVZU: Modifikatsiyalangan oligonukleitidlarning olinish usullari va qo’llanilishi REJA: 1. Oligonukleitidlarni ishlatilishi 2. Oligonukletidlarni olinish usullari 3. Oligonukletidlarni qo’lanilishi

Oligonukleotidlar biotexnologiya, molekulyar biologiya, diagnostika va terapiya kabi sohalarda keng qo'llanilishiga ega. Biroq, ularning tuzilishiga kimyoviy modifikatsiyalar kiritish orqali foydalanish spektrini kengaytirish mumkin. Yangi oligonukleotid analoglarini izlashda eng samarali soha antisens strategiyasi bo'lib, unda kimyoviy modifikatsiyalar gibridlanish, nukleazalarga chidamlilik, hujayralarni qabul qilish, selektivlik va asosan yaxshi farmakokinetik va farmakodinamik xususiyatlar kabi tegishli xususiyatlarni beradi. Kombinator texnologiya - bu oligonukleotidlari va ularning analoglari keng qo'llaniladigan yana bir tadqiqot yo'nalishi. Aptamerlar, yangi katalitik ribozimlar va deoksiribozimlar ma'lum xususiyat asosida tasodifiy sintezlangan kutubxonadan individuallashtirilgan RNK yoki DNK molekulalaridir. Ular PCR texnologiyalaridan foydalangan holda takroriy tanlash va kuchaytirish davrlari bilan aniqlanadi. O'zgartirilgan nukleotidlar kuchaytirish jarayonida ham, tanlashdan keyin ham kiritilishi mumkin. Oligonukleotidlar bir monomerning 3'-gidroksil guruhi va boshqasining 5'-gidroksil

guruhi o'rtasida hosil bo'lgan fosfodiester ko'priklar bilan bog'langan nukleozid birliklarining bir ipli oligomerlari. Ular, shuningdek, bir zanjirli DNK yoki RNKning qisqa bo'laklari sifatida belgilanishi mumkin. Tabiiy oligo nukleotidlar genlarni qurish, tanlash va aniqlash uchun keng qo'llanilgan. OLIGONUKLEOTIDLARNING QATTIQ FAZALI SINTEZI Fosforamidatlarning ulanish davri. Zamonaviy Oligonuklotidlar sintezi avtomatlashtirilgan Oligonukleotidlar sintezator ustunidagi qattiq tayanchda to'rt bosqichli sikl orqali yakunlanadi. 1-qadam: blokirovkadan chiqarish. sikl odatda 5'OH tritillangan nukleotid zanjiri bilan boshlanadi. 5'OH ni blokirovka qiluvchi tritil guruhi chiqariladi. Ushbu blokirovkalash bosqichida odatda DCM yoki boshqa qutbsiz erituvchida dixloroasetik kislota (DCA) yoki trixlorosirka kislotasi (TCA) ishlatiladi . Kuchli kislotalarni ishlatadigan yoki uzoq vaqt davomida sodir bo'ladigan blokirovkalash kimyoviy sintez qilinishi mumkin bo'lgan Oligonukeotidlarning maksimal uzunligiga ta'sir qiluvchi cheklovchi omillardan biri bo'lgan depurinatsiyaga olib kelishi mumkin. 2-qadam: ulash. Bloklashdan so'ng, bo'sh 5'OH kerakli ketmaketlikda keyingi nukleotidga ulanishga tayyor. Odatda, 3'OH ustida 2-siyanoetil bilan himoyalangan fosforamiditga ega bo'lgan nukleozid birlashtiruvchi sherik sifatida ishlatiladi. Bog'lanishga kislotali azol yoki shunga o'xshash birikma kabi aktivator vositachilik qiladi. Azollar va 2-siyanoetil fosfor amiditlari faollashtirilgan fosfor amiditlarini hosil qilish uchun qadoqlangan ustunga kirishdan oldin sintezatorning oligonukleotidlar trubkasida qisqa vaqt ichida aralashtiriladi. Bu aralashtirish fosfor amidit

azotining protonlanishiga yordam beradi va yaxshi tark etuvchi guruh hosil qiladi. Faollashtirilgan fosforamidat yuqori ulanish samaradorligiga ega bo'lishi uchun o'sib borayotgan Oligonukleotidlar zanjirlari soniga nisbatan katta miqdorda bo'lishi kerak. Muvaffaqiyatli ulanish beqaror fosfit triesterni beradi. 3-qadam: yopish. Ulanishdan so'ng, yaxshi bog'lanmagan zanjirlarning juda oz miqdori ularning erkin 5'OH guruhlari keyingi fosforamidat birikmalari bilan reaksiyaga kirishmasligi uchun yopilishi kerak, bu esa n - 1 o'chirishni keltirib chiqaradi, ularni ajratish qiyin bo'ladi. Kerakli Oligonukleotidlar. Bundan tashqari, guanozinning O6 pozitsiyasi ba'zan, kamdan-kam hollarda faollashtirilgan fosforamidatlar bilan reaksiyaga kirishishi mumkin. Yod va suv bilan oksidlanish ham bu joylarda depurinatsiyaga olib kelishi mumkin. Ushbu reagentlar qolgan bo'sh 5'OHlarni asillashtiradi, bu esa bu zanjirlarning o'sishiga to'sqinlik qiladi va O6 guanozin fosforamidit modifikatsiyasini olib tashlaydi. 4-qadam: Oksidlanish. Fosfit triesterlari fosfat triesterlariga oksidlanishi kerak. Bu zaif asos mavjud bo'lganda suvda yod bilan amalga oshiriladi. TBHP va boshqa reagentlar suvsiz erituvchilarda oksidlanish uchun ishlatilishi mumkin. Himoyadan mahrum qilish va bo'linish. Oldingi to'rtta qadam kerakli ketma-ketlikka erishilgunga qadar takrorlanadi. Oligonukleotidlar 5'OHda DMT bilan qoldirilishi mumkin yoki ular nukleozid bo'lmagan fosforamidit bilan qoplanishi mumkin. Bu fosforamidit kerakli xususiyatlarga ko'ra gidrofilik, gidrofobik, UV faol yoki hatto biotin kabi biologik faol qism bo'lishi mumkin. Fosfat triesterlari va har qanday N-atsil bilan himoyalangan asoslar

oligonukletidlar qattiq tayanchdan ajratilganda himoyadan chiqariladi. Bu erkin ONni berish uchun metil amin kabi asos bilan amalga oshiriladi. Keyin oligonukletidlar tozalanadi va tavsiflanadi. Enzimatik bog'lanish Qisqa oligonukleotidlarni bog'lash uchun fermentativ yondashuv uzoq deoksinuklein va ribonuklein kislotalarni sintez qilish uchun jozibali yo'lni taklif qiladi. Ushbu reaktsiyalar fosfodiester bog'lanish hosil qilish orqali oligonükleotidlarning 5' va 3' uchlarini molekulalararo bog'lanishiga yordam beradigan DNK yoki RNK ligazalari tomonidan katalizlanadi . DNK ligaza holatida ikkita oligodeoksinukleotid, biri 5' -fosforil donor guruhiga, ikkinchisi esa erkin 3'- gidroksil qabul qiluvchiga ega bo'lgan holda, substratga bo'lgan ehtiyojni tashkil qiladi. Fosforlangan va gidroksil