logo
  1. Главная страница
  2. Рефераты
  3. Общий
  4. BIOORGANIK KIMYO fanidan lab

BIOORGANIK KIMYO fanidan lab

Загружено в:

08.08.2023

Скачано:

0

Размер:

1612.5078125 KB
Скачать
O‘ZBEKISTO N RESPUBLIKASI OLIY VA O‘RTA MAX SUS TA’LIM VAZIRLIGI SAMARQAN D DAVLAT UN IVERSITETI TFF KIMY O BO‘LIMI III KURS 30_ GURUH TALABASI ________________________________________________________ _____________ ning FA N I DA N I. Laborat oriy a ishlari II. Must aqil ishi - Case-st udy (Variant № 2 )BIOORGANIK KIMYO Samarqand – 20 21 LABORATORIYA MASHG‘ULOTLARI I. MODUL. OQSILLAR KIMYOSI ................................................ OQSIL ERITMALARINI TAYYORLASH ....................................... 1. Rangli va cho‘ktirish reaksiyalari uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash 2. Tuzlanish va dializ uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash 3. Sut albumini eritmasini tayyorlash 4. O‘simlik oqsillarini ajratib olish 5. Tuxum albuminini tuz bilan cho‘ktirish orqali ajratib olish 6. Qoramol sutidan kazienni ajratish 7 . Mushak to‘qimalaridan oqsillarni ajratish OQSILLARNI TOZALASH ........................................................... 1. Oqsillarni dializ usulida tozalash OQSILLARNING DENATURA T SIYASI ........................................ 1 . Oqsillarning denaturatsiyasini o‘rganish 2. Ammoniy sulfat bilan cho‘ktirish 3. Osh tuzi bilan cho‘ktirish 4. Oqsillarni organik erituvchilar yordamida cho‘ktirish 5. Oqsillarni yuqori harorat ta’sirida cho‘kmaga tushirish 6. Oqsillarni organik va mineral kislotalar ta’sirida cho‘ktirish 7. Oqsillarni og‘ir metall tuzlari yordamida cho‘ktirish 8. Oqsillarni alkaloidlar ga xos reaksiyalar yordamida cho‘ktirish 9 . Tuxum albuminining izoelektrik nuqtasini aniqlash OQSIL VA AMINOKISLOTALARGA XOS RANGLI REAKSIYALAR 1 . Biuret reaksiyasi 2. Ningidrin reaksiyasi 3. Ksantoprotein reaksiyasi 4. Fol reaksiyasi 5. Milon reaksiyasi 6. Metioninga nitroprussid reaksiyasi 7. Argininga Sakagu ch i reaksiyasi 8. Triptofanga Adamkevich reaksiyasi 9. Gistidinga Pauli reaksiyasi 10. Aminokislotalarni qog‘oz xromatografiyasi yordamida ajratish 11. Oqsil miqdorini L o uri usulida miqdoriy aniqlash MURAKKAB OQSILLAR .............................................................. 1. So‘lak tarkibidagi mutsinni aniqlash 2. Gemoglobining gemin guruhini uchun sifat reaksiya II. MODUL. UGLEVODLAR KIMYOSI ......................................... UGLEVODLARNI AJRATIB OLISH .............................................. 1. Uglevodlarni quruq mevalar (mayiz, turshak, meva qoqilari) dan ajratib olish 2. Saxarozaning gidrolizi MONOSAXARIDLARGA XOS SIFAT REAKSIYALARI .................. 1. Uglevodlarni α –naftol yordamida aniqlash 2. Fruktozani rezorsin (Selivanov usuli) yordamida aniqlash 3. Pentozalarni orsin yordamida aniqlash 4. Dezoksiribozani difenilamin yordamida aniqlash 5. Nilander reaksiyasi 6. Barfed reaksiyasi 7. Feling reaksiyasi 8. Polisaxaridlarga xos rangli reaksiyalar 9. O‘simliklarning yashil barglaridagi kraxmalni aniqlash 10. Piyoz ekstraktidagi glukoza va boshqa qaytaruvchi shakarlarni aniqlash 11. Kraxmalni miqdoriy aniqlash III. MODUL. NUKLEIN KISLOTALAR KIMYOSI ......................... NUKLEOPROTEIDLARNI AJRATIB OLISH VA GIDROLIZ REAKSIYALARINI O‘RGANISH ................................................. 1. Achitqidan nukleoproteidlarni ajratib olish va gidrolizlash 2. O‘simlik to‘qimalaridan DNK ni ajratib olish 3. Buqoq bezi yoki qora taloq, to‘qima dezoksiribonukleoprotei d ini ajratish NUKLEIN KISLOTALARNI SIFAT VA MIQDORIY ANIQLASH ..... 1. Hayvon to‘qimalaridagi DNK miqdorini aniqlash 2. DNK ning nukleotid tarkibini aniqlash 3. DNK mi q dor i ni kolorimetrik usul bilan aniqlash 4. Kolorimetrik usul bilan RNK miqdorini aniqlash IV. MODUL. LIPIDLAR KIMYOSI ............................................... YOG‘LARNI AJRATIB OLISH ...................................................... 1. Biologik suyuqliklardan yog‘ ajratib olish 2. Yog‘larning sovunlanishi va yog‘ kislotalari olish 3. Yog‘larning eruvchanligini aniqlash 4. Yog‘larni emulsiya holatiga o‘tkazish 5 . Yog‘lardagi glitsirenga xos reaksiya YOG‘LARNING ASOSIY SIFAT KO‘RSATKICHLARINI ANIQLASH …………………………………………………………………. 1. Yog‘larning to‘yinganlik darajasini aniqlash 2. Yog‘larning kislota sonini aniqlash 3. Yog‘larning sovunlanish sonini aniqlash TAVSIYA ETILADIGAN ADABIYOTLAR ...................................... I. MODUL. OQSILLAR KIMYOSI OQSILLARNI TABIIY MANBALARDAN AJRATIB OLISH OQSIL ERITMALARINI TAYYORLASH VA TOZALASH 1. Rangli va cho‘ktirish reaksiyalari uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum, distillangan suv, tubi yassi kolbalar, o‘lchov silindrlari yoki stakanlari, bint (doka, surp). Bitta tovuq tuxumining oqi sarig‘idan ajratiladi va 15-20 barobar ko‘p miqdordagi (ta x minan, 500 ml) distillangan suvda eritiladi. Eritma 3-4 qavat qilingan doka ( surp ) dan fil’trlanadi. Tayyorlangan eritma muzlatgichda saqlanadi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. Tuzlanish va dializ uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum, distillangan suv, osh tuzining to‘yingan eritmasi, tubi yassi kolbalar, o‘lchov silindrlari yoki stakanlari, bint (surp). Uch dona tovuq tuxumi sarig‘idan ajratiladi va 700 ml distillangan suvda eritiladi va ustiga 300 ml osh tuzining to‘yingan eritmasi quyiladi. Eritma 3-4 qavat qilingan doka ( surp ) dan fil’trlanadi. Tayyorlangan eritma muzlatgich da saqlanadi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. Sut albumini eritmasini tayyorlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: qoramol suti, distillangan suv, ammoniy sulfatning to‘yingan eritmasi, tubi yassi kolbalar, o‘lchov silindrlari yoki stakanlari, bint (doka, surp), qog‘oz fil’trlar. 200 ml qoramol sutiga teng hajmda ammoniy sulfatning to‘yingan eritmasi qo‘shiladi, aralashtiriladi va 10-15 min. qoldiriladi. So‘ngra buklangan qog‘oz fil’trda fil’trlanadi. Eritmada – albuminlar, cho‘kmada – globulinlar va kazein bo‘ladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 4. O‘simlik oqsillarini ajratib olish Kerakli reaktivlar va jihozlar: bug‘doy uni, distillangan suv, gigroskopik vata, tubi yassi kolbalar, o‘lchov silindrlari yoki stakanlari, bint (doka, surp), qog‘oz fil’trlar. 40 g bug‘doy uniga 160 ml distillangan suv qo‘shiladi, aralashtiriladi va muzlatgich ga (1-2 0 S) bir sutka qoldiriladi. So‘ngra qayta aralashtiriladi va gigroskopik vata orqali fil’trlanadi, so‘ngra buklangan fil’tr qog‘ozida fil’trlanadi. Eritmada asosan albuminlar bo‘ladi. Tayyorlangan eritma muzlatgichda saqlanadi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 5. Tuxum albuminini tuz bilan cho‘ktirish orqali ajratib olish Kerakli reaktivlar va jihozlar: 100 ml o‘lchov silindri, stakan, sentrifuga, (vakuum– fil’trlagich qurilmasi), ammoniy sulfat, 1 dona tovuq tuxumi, dializ membranasi, dializ uchun kamera (2 l). Tuxum oqsili sarig‘idan ajratiladi va o‘lchagich silindriga solinib, uning hajmi suv bilan 50 ml gacha yetkaziladi va 15,65 g ammoniy sulfat qo‘shib, asta-sekin aralashtiriladi. Hamma tuz bo‘laklari erigandan so‘ng yarim to‘yingan tuz eritmasidan tushgan globulin cho‘kmasi sintrifuga qilinib (3-5 ming ayl/min) yoki qalin fil’tr qog‘oz orqali fil’trlab ajratiladi. Fil’trat (cho‘kma ustidagi suyuqlik) o‘lchagich silindrga yig‘iladi, hajmi o‘lchanib, tuz erishi qulay bo‘lishi uchun stakanga o‘tkaziladi va eritmada ammoniy sulfat tuzining to‘yinish darajasi 70% gacha yetkaziladi. Kerakli miqdordagi ammoniy sulfat erigandan so‘ng, loyqalangan aralashma cho‘kma hosil qilish uchun 30-40 minut qoldiriladi. Ovalbumin cho‘kmasi globulinlar kabi yig‘ib olinadi. Agar fil’trlash ishlatilgan bo‘lsa – fil’tr qog‘oz cho‘kma bilan birgalikda oz hajmdagi suvda aralashtirilib, dializ qopchasiga (naycha) solinadi va tuzni chiqarib yuborish uchun dializ qilinadi. Buning uchun dializ qopchasi (naycha) iliq suv bilan h o‘llanib bir uchi bog‘lanadi va varonka yordamida oqsil eritmasi bilan to‘ldiriladi. Dializ 4 marta 20 ml pH 7,4 bo‘lgan natriy fosfat buferi eritmasida har galgi almashinishi 1 soatdan kam bo‘lmagan holda olib boriladi. Dializning dastlabki 2 soatini suv bilan olib borish mumkin. Dializatdagi ovalbuminning konsentratsiyasi 260 va 280 nm to‘lqin uzunligida yutilishi bo‘yicha aniqlanadi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 6. Qoramol sutidan kazienni ajratish Kerakli reaktivlar va jihozlar: 0,5 l o‘lchagich stakan, sentrifuga (vakuum fil’trlagich qurilmasi), pH-metr, suvchiz sirka kislota, etil spirti (100 ml), efir (100 ml) pH 8,5 ga teng bo‘lgan 150 ml natriy karbonat bufer eritmasi, sut (300 ml). Bu usul oqsillarning izoelektrik nuqtasidagi eruvchanligining juda kam bo‘lishiga asoslangan. Oqsillar konsentrlangan eritmalardan o‘z izoelektrik nuqtalarida cho‘kmaga tushadilar. 300 ml sutni aralashtirib turilgan holda 0,5 M CH 3 COOH qo‘shilib (tomchilab) achitiladi. Bunda pH (pH-metr yoki indikator qog‘ozi yordamida tekshirib turiladi) 4,5 ga yetkaziladi va achitilgan sut cho‘kma hosil qilishligi uchun 1 soat sovuq xonada qoldiriladi. pH ning 4,5 dan kamaymasligiga harakat qilish kerak, chunki muhit kislotaliroq bo‘lsa kazien erib ketadi. Kazien cho‘kmasi sentrifugalab yoki fil’trlanib ajratiladi. Kazein cho‘kmasiga teng hajmda spirt qo‘shib aralashtiriladi va spirt fil’trlanib (yoki sentrifuga yordamida) ajratiladi. Ushbu jarayon yana bir marotaba qaytariladi. Spirt bilan suvchizlantirilgan kazein cho‘kmasini, yog‘ini ajratish uchun uch marotaba 50 ml dan efir bilan ishlanadi. Tamoman yog‘sizlantirilgan kazein havoda quritiladi va pH 8,5 ga teng bo‘lgan 100-150 ml natriy karbonat eritmasida eritiladi. Kazein eritmasi sentrifugalash yoki fil’trlash bilan tindiriladi. Eritma tiniq bo‘lishi kerak. Kazein, yuqorida yozilganidek tindirish uchun ikkinchi maratoba cho‘ktiriladi. Qayta cho‘ktirilgan kazein fil’tr qog‘ozlari orasida siqiladi va quritiladi, iloji boricha quritish oldidan spirt va efir bilan ishlovni qaytarish kerak. Quritilgan kazein tortiladi va unumi tajribaga olingan sut miqdoriga nisbatan aniqlanadi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 7 . Mushak to‘qimalaridan oqsillarni ajratish Kerakli reaktivlar va jihozlar: 2 g maydalangan mushak to‘qimasi, kaliy xloridning 5% li eritmasi, natriy gidroksidning 0,1 mol/l eritmasi, uchxlorsirka kislota (UXSK) ning 10% li eritmasi, sentrifuga, sentrifuga tarozi, sentrifuga probirkalar, chinni hovoncha, shisha qum, oddiy probirka va shtativlar, shisha tayoqcha, pipetka, fil’tr qog‘ozi, doka va voronkalar. 2 g mushak to‘qimasini qaychi bilan maydalab, hovonchaga solinadi. Uning ustiga 2 ml 5% li kaliy xlorid eritmasi va shishasimon qum solib, ishqalanadi. So‘ng 3 ml kaliy xlorid eritmasi solinib, 5 daqiqa ishqalash davom ettiriladi. Bunda aralashma bir xil holatga keladi, buni ekstrakt deyiladi. Olingan aralashma ikkita sentrifuga probirkasiga solinadi, shisha qum hovonchada qoladi. Probirkalar sentrifuga tarozida pipetka orqali 5% li kaliy xlorid eritmasi qo‘shish orqali bir xil og‘irlikka keltiriladi. Gomogenat 15 daqiqa 4000 ayl/min da sentrifugalanadi. Bunda hujayra bo‘lakchalari, parchalangan hujayralar, biriktiruvchi to‘qima tolalari cho‘kmaga tushadi. Cho‘kma ustidagi suyuqlik toza probirkaga olinadi. Olingan ekstrakt bilan oqsilga xos reaksiyalar o‘tkaziladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… OQSILLARNI TOZALASH, FIZIK-KIMYOVIY XOSSALARINI O‘RGANISH OQSILLARNI TOZALASH 1. Oqsillarni dializ usulida tozalash Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum oqsilining osh tuzi bilan aralashmasi, natriy ishqori eritmasi, mis sulfat eritmasi, sellofan yoki kollodiydan tayyorlangan qopcha, distillangan suv, tubi yassi kolbalar yoki kimyoviy stakanlar, shisha tayoqcha. Dializ usulida yuqori molekulyar oqsillar eritmalari kichik molekulyar massali moddalar (tuzlar, shakarlar va h.k.) dan tozalanadi. Sellofan yoki kollodiydan tayyorlangan qopchaning yarmigacha tuxum oqsili eritmasining osh tuzi bilan aralashmasi solinadi. Qopcha shisha tayoqcha yordamida distillangan suv solingan stakanga botiriladi (rasm). Dializ xona temperaturasida olib boriladi. 30-40 minutdan so‘ng ikkita probirkaga dializator dan 2 ml hajmda suyuqlik ( suv ) olinadi. Biriga xlor ioni uchun sifat reaksiya (masalan, kumush nitrat qo‘shiladi), ikkinchisida esa oqsilga (masalan, biuret) sifat reaksiyasi olib boriladi. Kuzatilgan natijalar laboratoriya jurnaliga qayd etiladi. Dializni tezlatish uchun suvni davriy (har 15-20 minutda) almashtirib turish yoki oqim tipidagi dializatorlardan foydalanish mumkin. OQSILLARNING DENATURA T SIYASI 1 . Oqsillarning denaturatsiyasini o‘rganish Kerakli reaktivlar va jihozlar: to‘yingan osh tuzidagi tuxum oqsili eritmasi, kristall holdagi osh tuzi (juda maydalanib, pudra holiga keltirilgan), ammoniy sulfat kristallari (juda maydalanib, pudra holiga keltirilgan), sirka kislotaning 1% eritmasi, natriy ishqorining 10% li eritmasi, magniy sulfat kristallari, mis sulfatning 1% li eritmasi. Turli faktorlar oqsillar makromolekulasi tuzilishining o‘zgarishiga olib keladi. Ushbu jarayon denaturatsiya deyiladi. Odatda denaturatsiya oqsillarning to‘rtlamchi va uchlamchi strukturasining buzilishiga sabab bo‘ladi, bunda peptid bog‘lar saqlanib qoladi. Ta’sir etuvchi faktorlarni ikkiga: fizikaviy va kimyoviy ta’sirlarga ajratish mumkin. Fizikaviy faktorlarga – temperatura, mexanik ta’sir, ul’tratovush ta’siri, ionlovchi nurlanish ta’siri kabilarni, kimyoviy faktorlarga esa – og‘ir metallar, mineral va organik kislotalar, ammoniy, ishqoriy va ishqoriy-yer metallari tuzlari eritmalari hamda organik erituvchilar bilan cho‘ktirishlar kabilar kiradi. Oqsillarni ng cho‘kishi (denatura t siyasi) qaytar va qaytmas bo‘ladi. Qaytar denaturatsiya ammoniy, ishqoriy metallar, ishqoriy-yer metallarining neytral eritmalari (tuzlanish), spirt, a t seton, efir va boshqa organik erituvchilar ta’sirida bo‘ladi. Qaytmas denaturatsiya yuqori harorat, mineral va ba’zi organik kislotalarning konsentrlangan eritmalari, og‘ir metallar ionlari, alkaloidlar, detergentlar va bo‘yoqlar ta’sirida yuzaga keladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. Ammoniy sulfat bilan cho‘ktirish Kerakli reaktivlar va jihozlar: to‘yingan osh tuzidagi tuxum oqsili eritmasi, ammoniy sulfat kristallari (juda maydalanib, pudra holiga keltirilgan), natriy ishqorining 10% li eritmasi, mis sulfatning 1% li eritmasi, fil’tr qog‘ozi. Probirkaga 2-3 ml tuxum oqsili eritmasi quyiladi va unga teng hajmdagi ammoniy sulfatning to‘yingan eritmasi qo‘shiladi va aralashtiriladi. Globulinlar cho‘kmaga tushadi, albuminlar esa eritmada qoladi. Cho‘kma qog‘oz fil’tri orqali fil’trlanadi. Fil’tratga juda mayda qilib tuyilgan ammoniy sulfat kukunidan to‘yingan eritma hosil bo‘lguncha qo‘shiladi. Bunda albuminlarning cho‘kmasi hosil bo‘ladi. Cho‘kma fil’trlanadi va fil’tratga biuret reaksiyasi o‘tkaziladi. Agar cho‘ktirish to‘liq bo‘lgan bo‘lsa, reaksiya manfiy bo‘lishi kerak.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. Osh tuzi bilan cho‘ktirish Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum oqsili eritmasi, kristall holdagi osh tuzi (juda maydalanib, pudra holiga keltirilgan), sirka kislotaning 1% eritmasi, natriy ishqorining 10% li eritmasi, magniy sulfat kristallari, mis sulfatning 1% li eritmasi. Probirkaga 2-3 ml tuxum oqsili quyiladi va to‘yingan eritma hosil bo‘lguncha osh tuzi kukunidan qo‘shiladi. 5-6 minutdan so‘ng probirkada cho‘kma (globulinlar) hosil bo‘lganligini kuzatish mumkin. Albuminlar ishqoriy va ishqoriy-yer metallari tuzlarining neytral eritmalarida cho‘kmaga tushmaydi. Cho‘kma fil’trlanadi va fil’tratga 1% li sirka kislota eritmasi quyiladi. Hosil bo‘lgan cho‘kma fil’trlanadi va fil’tratga biuret reaksiyasi o‘tkaziladi. Agar cho‘ktirish to‘liq bo‘lsa, reaksiya manfiy bo‘lishi lozim. Oqsillarni tuzlanishi sanoatda keng ishlatiladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 4. Oqsillarni organik erituvchilar yordamida cho‘ktirish Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi, spirt yoki atseton, natriy xloridning to‘yingan eritmasi, probirkalar, pipetkalar, shtativlar. Spirt, atseton, efir va boshqa shu kabi organik erituvchilarda oqsillar cho‘kmaga tushadi. Spirt oqsil zarrachasining suv pardasini yemirib, uning eritmadagi holatini beqarorlashtiradi. Probirkadagi 5 tomchi oqsil eritmasiga 15-20 tomchi etil spirti yoki atseton tomiziladi. Eritma xiralashadi. Uning ustiga 1 tomchi to‘yingan natriy xlorid eritmasi tomizilganda bir ozdan so‘ng cho‘kma tushgani kuzatiladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 5. Oqsillarni yuqori harorat ta’sirida cho‘kmaga tushirish Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi , 1% li va 10% li atsetat kislota eritmasi, 1% li natriy xlorid eritmasi, 10% li natriy gidroksid eritmasi , probirkalar, pipetkalar, shtativlar . 5 ta probirka olib, har biriga 1 ml dan oqsilning 1% li eritmasidan quyiladi. Birinchi probirka to‘g‘ridan-to‘g‘ri yuqori harorat ta’sirida qizdiriladi. Probirkada oqish rangli oqsilning denaturatsiya mahsuloti hosil bo‘ladi. Ikkinchisiga 0,1 ml sirka kislotaning 1% li eritmasidan qo‘shib qizdiriladi. Probirkada oqish rangli cho‘kma hosil bo‘ladi. Bunda oqsil o‘zining izoelektrik nuqtasi yaqin bo‘lganligi uchun cho‘kma hosil qiladi. Uchinchi probirkaga 0,5 ml 10% li sirka kislota qo‘shiladi. Probirka qizdirilganda cho‘kma hosil bo‘lmaydi, chunki kislotali sharoitda oqsil molekulalari musbat zaryadga ega bo‘lib qoladi. To‘rtinchi probirkaga 0,1 ml to‘yingan osh tuzi eritmasidan qo‘shib qizdiriladi, bunda oqsil cho‘kmaga tushadi. Bunga sabab oqsil molekulasining musbat zaryadi osh tuzi ionlari ta’sirida neytrallanishidir. Beshinchi probirkaga esa 0,5 ml 10% li natriy gidroksidning eritmasidan qo‘shib qizdiriladi. Oqsil molekulasi manfiy zaryadga ega bo‘lib, cho‘kma hosil qilmaydi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 6. Oqsillarni organik va mineral kislotalar ta’sirida cho‘ktirish Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi , konsentrlangan nitrat kislota, konsentrlangan sulfat kislota, 10% li uchxlorsirka kislota, 10% li sulfosalitsil kislota , probirkalar, pipetkalar, shtativlar. Oqsil organik kislotalar (uchxlorsirka kislota, sulfosalisil kislota) va konsentrlangan mineral kislotalar ta’sirida denaturatsiyaga uchraydi, suvsizlanishi va zaryadsizlanishi tufayli cho‘kmaga tushadi. Sulfat va xlorid kislotalar uzoq vaqt ta’sir qilsa, oqsil qisman gidrolizga uchrab, cho‘kma asta-sekin erib ketadi. Nitrat kislotada cho‘kma sekin eriydi. Organik kislotalar ta’sirida cho‘ktirish keng qo‘llanilmoqda. Uchxlorsirka kislota miqdoriy tahlilda oqsilsiz fil’trat olish uchun, sulfosalisil kislota, nitrat kislota klinik laboratoriyalarda oqsilni aniqlash uchun ishlatiladi. 2 ta probirka olib, birinchisiga 10-15 tomchi konsentrlangan nitrat kislota, ikkinchisiga shuncha miqdorda konsentrlangan sulfat kislota quyiladi. Har ikkala probirkani 45 0 li burchak ostida o ‘ rnatib, 10-15 tomchi 1% li oqsil eritmasidan ohistalik bilan tomiziladi. Har ikki qavat suyuqlik chegarasida yupqa oqsil cho‘kmasining pardasi hosil bo‘ladi. 2 ta probirkaga 5 tomchi 1% li oqsil eritmasini tomizib, birinchisiga 1-2 tomchi 10% li uchxlorsirka kislota, ikkinchisiga 1-2 tomchi 10% li sulfosalitsil kislota qo‘shib, oq cho‘kma hosil bo‘lishi kuzatiladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 7. Oqsillarni og‘ir metall tuzlari yordamida cho‘ktirish Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi , qo‘rg‘oshin atsetatning 5% li eritmasi, mis sulfatning 5% li eritmasi , probirkalar, pipetkalar, shtativlar . Og‘ir metall tuzlari ta’sirida oqsillar cho‘kma hosil qiladi. Oqsillarni cho‘ktirishda ko‘pincha simob tuzlari (simob nitrat), qo‘rg‘oshin tuzlari (qo‘rg‘oshin atsetat), mis sulfat, kumush nitrat, rux sulfat va boshqalardan foydalaniladi. Agar tuzli eritmalardan ko‘p miqdorda qo‘shilsa, cho‘kma erib ketadi. Bunga sabab og‘ir metall tuzlari oqsil molekulasi tomonidan adsorbsiya qilinib, musbat zaryadga aylanadi. Ikkita probirkaga 1 ml dan 1% li oqsil eritmasidan quyiladi. Birinchi probirkaga qo‘rg‘oshin atsetatning 5% li eritmasidan 5-6 tomchi, ikkinchisiga mis sulfatning 5% li eritmasidan 5-6 tomchi qo‘shiladi. Har ikkala probirkada ham cho‘kma hosil bo‘lishi kuzatiladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 8. Oqsillarni alkaloidlar ga xos reaksiyalar yordamida cho‘ktirish Kerakli reaktivlar va jihozlar: 1% li oqsil eritmasi, 10% li pikrin kislota, to‘yingan tannin eritmasi, 5% li sariq qon tuzi eritmasi, probirkalar, pipetkalar, shtativlar. Oqsil eritmasiga tannin, pikrat kislota, sariq qon tuzi kabi alkaloidlar reaktivlari qo‘shilsa, cho‘kmaga tushadi. Bu reaksiya oqsil molekulasidagi alkaloidlarni eslatuvchi azotli geterosiklik guruhlar (pirrol, indol, imidazol halqalari) bo‘lishiga asoslangan. Sirka kislota yordamida kuchsiz kislotali sharoit yaratilsa, oqsil zarrachasida musbat zaryad paydo bo‘ladi va manfiy zaryadlangan cho‘ktiruvchi ionlari bilan o‘zaro ta’sirlashuvini osonlashtiradi. Kuchli mineral kislotalar, organik kislotalar dissotsiatsiyalanishini susaytirib, oqsilni alkaloid reaktivlari bilan cho‘ktirishga halaqit beradi. 3 ta probirka olib, birinchisiga 2-3 tomchi 10% li pikrin kislota, ikkinchisiga 2-3 tomchi tanninning to‘yingan eritmasidan, uchinchisiga 2-3 tomchi 5% li kaliy ferrosianid eritmasidan tomizib, hammasiga 1 tomchidan 10% li sirka kislota, 5 tomchidan 1% li oqsil eritmasidan tomiziladi. Uchala probirkada ham cho‘kma hosil bo‘lishi kuzatiladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 9 . Tuxum albuminining izoelektrik nuqtasini aniqlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum albumini eritmasi, sirka kislotaning 0,1 M eritmasi, natriy atsetatning 0,1 M eritmasi, etil spirti, 5 ta probirkalar, pipetkalar. Izoelektrik nuqtada oqsillar beqaror bo‘ladi. Teng musbat va manfiy zaryadlarga ega (izoelektrik) oqsil molekulasi suvda yomon eriydi va tezda cho‘kma hosil qiladi. Har bir oqsilning o‘ziga xos izoelektrik nuqtasiga mos keluvchi pH qiymati mavjud. Masalan, kazein uchun pH=4,7; tuxum albumini uchun pH=4,8; jelatina uchun pH=4,9; zein (makkajo‘xori oqsili) uchun pH=6,2; protaminlar va gistonlar uchun esa kuchsiz ishqoriy muhitda bo‘ladi. Beshta probirka olib, quyida keltirilgan jadvalga muvofiq miqdorda sirka kislota va natriy atsetat eritmalari quyiladi. Har bir probirkaga 1 ml dan tuxum oqsili eritmasi qo‘shiladi va yaxshilab aralashtiriladi. So‘ngra ularning ustiga 4 ml dan etil spirti eritmasi qo‘shiladi. 5-10 min. so‘ng barcha probirkalar ko‘zdan kechiriladi va ularning loyqalanganlik darajasi baholanadi. Eng ko‘p loyqalangan eritmadagi pH qiymati tuxum oqsilining izoelektrik nuqtasini ko‘rsatadi. Olingan natijalar jadvalga kiritiladi va tegishli xulosa qilinadi. Probirka Bufer aralashma tarkibi, Aralashma Tuxum Etil Loyqalanganlik raqami ml pH i oqsili eritmasi, ml spirti (70%), ml darajasi (5 ballik tizimda) 0,1 M CH 3 COOH 0,1 M CH 3 COONa 1 1.8 0.2 3.8 1 4 2 1.4 0.6 4.4 1 4 3 1.0 1.0 4.7 1 4 4 0.6 1.4 5.1 1 4 5 0.2 1.8 5.7 1 4 AMINOKISLOTALAR VA OQSILLARNI SIFAT HAMDA MIQDORIY ANIQLASH OQSIL VA AMINOKISLOTALARGA XOS RANGLI REAKSIYALAR Biologik ob ’ ektlar yoki turli eritmalarda oqsil mavjudligini rangli reaksiyalar yordamida aniqlash mumkin. Bu reaksiyalar oqsil tarkibidagi turli xil aminokislotalar ning funksional gu ruh lar i yoki peptid bog‘larining xossalariga asoslangan. Bir qancha kimyoviy moddalar oqsilga ta‘sir etganda reaksiya mahsuloti sifatida turli rangli birikmalar hosil qiladi. Xuddi shu reaksiyalar asosida oqsillar va ularning tarkibidagi aminokislotalarni sifat va miqdor jihatdan aniqlash usullari ishlab chiqilgan. Rangli reaksiyalar tabiatiga ko‘ra ikki xil: universal va o‘ziga xos rangli reaksiyalarga bo‘linadi. Birinchi turdagi reaksiyalar hamma oqsillar uchun (biuret, ningidrin kabilar) xos bo‘lib, ikkinchi xili esa oqsil molekulasida u yoki bu xil aminokislota qoldiqlari borligini aniqlashga (ksantoprotein, Million, Fol, Adamkevich reaksiyalari va boshq.) qaratilgan. Aminokislotalarni biologik suyuqliklar yoki to‘qima ekstraktlarida shu o‘ziga xos reaksiyalar yordamida aniqlash mumkin. Rangli reaksiyalarni tuxum oqsili, jelatina eritmalari, bir necha marta suyultirilgan qon zardobi, turli hayvon va o‘simlik to‘qimalari ekstraktlari bilan amalga oshirish mumkin. Ishning natijalari jadval ko‘rinishida ifodalanadi. № Reaksiyaning nomi Tekshirilayotgan manba Qo‘llanilayotgan reaktivlar Kuzatilgan rang Izoh Aminokislotalar va oqsillarni sifat jihatdan aniqlash uchun bir necha rangli reaksiyalar taklif qilingan. Ulardan ba’zilarini keltiramiz: Reaksiya Reaktiv Aniqlanuvchi AK Rang Millon HgNO 3 ning nitrat va nitrit kislotalardagi eritmasi Tirozin Qizil Ksantoprotein Qaynoq kons. HNO 3 Fenilalanin, tirozin Sariq Gopkins-Koul Glioksil kislotaning kons. H 2 SO 4 dagi eritmasi Triptofan Ko‘k- binafsha Erlix n-Dimetilaminobenzaldegidning kons. HCl dagi eritmasi Triptofan Ko‘k Sakaguchi α-Naftol va natriy gipoxlorit Arginin Qizil Nitroprussid Natriy nitroprussidning suyul. ammiakdagi eritmasi Sistein Qizil Salliven 1,2-Naftoxinon-4-sulfatning natriyli tuzi va natriy bisulfit Sistein Qizil Pauli Diazolangan sulfanil kislotaning ishqoriy eritmasi Gistidin, tirozin Qizil Folin- Chokalteu Fosfomolibdeno-volframat kislota Tirozin Ko‘k 1 . Biuret reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum oqsili eritmasi, natriy ishqorining 10% li eritmasi, mis sulfatning 1% li eritmasi. Probirkaga 2 ml tuxum oqsili eritmasi quyiladi va unga teng hajmda natriy ishqori eritmasi qo‘shiladi hamda 1-2 tomchi mis sulfat eritmasi tomiziladi. Qizil-binafsha yoki ko‘k-binafsha rang hosil bo‘lishi kuzatiladi. Ushbu reaksiya peptid bog‘i uchun sifat reaksiyadir.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. Ningidrin reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum oqsili eritmasi, glitsinning 0,1% li eritmasi, ningidrinning 0,1% li spirtli eritmasi. Bitta probirkaga 1-2 ml glitsin eritmasidan, ikkinchisiga xuddi shuncha miqdorda oqsil eritmasidan quyiladi. Har ikkala probirkaga ningidrin eritmasidan (birinchisiga 5-6 tomchi, ikkinchisiga esa 10-12 tomchi) tomiziladi va taxminan bir minut davomida qizdiriladi. Birinchi probirkada tezda binafsha-ko‘k yoki binafsha rang paydo bo‘ladi, oqsil bo‘lgan probirkada esa rang sekin hosil bo‘ladi, shuningdek, qizil-binafsha gardishli bo‘ladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. Ksantoprotein reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum oqsili eritmasi, kons. nitrat kislota, natriy ishqorining 10% li eritmasi. Tarkibida aromatik aminokislotalar (fenilalanin, tirozin) mavjud bo‘lgan oqsillar nitrat kislota bilan sariq rangli birikmalar hosil qiladi. Probirkaga 1-2 ml tuxum oqsili eritmasi solinadi, unga 8-10 tomchi kons. nitrat kislota tomiziladi va ohista qizdiriladi. Sariq rangli cho‘kma hosil bo‘lishi kuzatiladi. Probirka sovutilgandan so‘ng uning devori bo‘ylab natriy ishqori eritmasi quyiladi – eritma rangi zarg‘aldoq yoki sariq-zarg‘aldoq tusga kiradi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 4. Fol reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum oqsili eritmasi, qo‘rg‘oshin atsetatning 1% li eritmasi, natriy ishqorining 15-20% li eritmasi. Probirkaga 2 ml tuxum oqsili eritmasi quyiladi, ustiga 1-1,5 ml natriy ishqori eritmasidan qo‘shiladi va ohistalik bilan qaynaguncha qizdiriladi hamda 1-2 min. qaynatiladi. So‘ngra 2-3 tomchi qo‘rg‘oshin atsetat eritmasidan tomiziladi. Probirkada qo‘ng‘ir-qora yoki qora rangning hosil bo‘lishi tekshirilayotgan oqsil namunasi tarkibida oltingugurt saqlagan aminokislotalar (sistein, sistin) mavjudligidan dalolat beradi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 5. Milon reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi, 0,1% li fenol eritmasi, 0,05% li tirozin eritmasi, Milon reaktivi (simobning nitrat kislotadagi eritmasi), probirkalar, pipetkalar, shtativlar. 3 ta probirka olib, birinchisiga 1 ml 1% li tuxum oqsili, ikkinchisiga 1 ml 0,05% li tirozin eritmasi, uchinchisiga 0,1% li 1 ml fenol eritmasidan solib, 5 tomchidan har biriga Milon reaktivi tomiziladi. Probirkalar sekin-asta qizdirilganda dinitrotirozinning simobli tuzi hosil bo‘lgani sababli qizil rang hosil bo‘ladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 6. Metioninga nitroprussid reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi , natriy gidroksidning 20% li eritmasi , natriy nitroprussidning 5% li eritmasi . 5 tomchi oqsil eritmasiga 4-5 tomchi natriy gidroksidning 20% li eritmasidan solib , bir necha daqiqa qizdiriladi . Eritma sovitiladi va unga 2-3 tomchi natriy nitroprussid eritmasi tomiziladi . Suyuqlik qizil tusga kiradi . Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 7. Argininga Sakagu ch i reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi , bug ‘ doy oqsili , 0,05% li arginin eritmasi , natriy gidroksidning 10% li eritmasi ,  - naftolning 0,2% li spirtli eritmasi , natriy gipobromidning 2% li eritmasi , p robirkalar , pipetkalar , shtativlar . 3 ta probirka olib , birinchisiga 5 tomchi 1% li tuxum oqsili , ikikinchisiga 5 tomchi 1% bug ‘ doy oqsili , uchinchisiga 5 tomchi 0,05% li arginin eritmasidan quyib , hamma probirkalarga 5 tomchidan 10% li natriy gidroksid eritmasidan , 3 tomchi  - naftolning 0,2% li spirtdagi eritmasi va (1-5 tomchi ) 2% li gipobromid eritmasidan tomiziladi . Probirkalardagi suyuqlik qizil rangga kiradi . Argininning guanidin guruhi  - naftol bilan ishqoriy muhitda gipobromid bilan oksidlanib , pushti - qizg ‘ ish rangli kondensatsiyalangan mahsulot hosil qiladi .  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 8. Triptofanga Adamkevich reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: 1% li oqsil eritmasi, 1% li bug‘doy oqsili, 1% li jelatina eritmasi , 0,05% li triptofan eritmasi, muz-sirka kislota, konsentrlangan sulfat kislota , probirkalar, pipetkalar, shtativlar . Adamkevich reaksiyasi indol halqasi uchun xos bo‘lib, oqsillar va polipeptidlar konsentrlangan sulfat kislota ishtirokida glioksil kislota bilan qizg‘ish-binafsha rang beradi. Bu reaksiya oqsillar tarkibidagi triptofanga bog‘liq bo‘lib, kislotali muhitda glioksil kislotaning aldegid guruhi bilan reaksiyaga kirishib, rangli moddalar kondensati hosil bo‘ladi. Glioksilat kislota doimo oz miqdorda muz-sirka kislota tarkibida bo‘ladi, shuning uchun bu kislota glioksilat kislota olinadigan manba sifatida ishlatiladi. 4 ta probirka olib, birinchisiga 5 tomchi 1% li tuxum oqsili, ikkinchisiga 5 tomchi 1% li bug‘doy oqsili, uchinchisiga 5 tomchi jelatina eritmasi, to‘rtinchisiga 5 tomchi 0,05% li triptofan eritmasidan quyib, ularning har biriga 5 tomchidan sirka kislota quyiladi. Probirkalardagi suyuqlik sekin-asta qizdiriladi, so‘ngra sovitilgach, ohistalik bilan probirka devori bo‘ylab 10 tomchidan konsentrlangan sulfat kislota tomiziladi. 1-2 daqiqa turgandan keyin 1,2 va 4 probirkalarda ikki qavat suyuqlik chegarasida qizg‘ish-binafsha rang paydo bo‘ladi. Agar probirkalar qaynab turgan suv hammomiga qo‘yilsa, rangning yuzaga chiqishi tezlashadi. Jelatina molekulasida triptofan bo‘lmaganligi uchun uchinchi probirkada rang paydo bo‘lmaydi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 9. Gistidinga Pauli reaksiyasi Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi, 1% jelatina eritmasi, natriy karbonat eritmasi, diazoreaktiv, probirkalar, pipetkalar, shtativlar. Gistidin, triptofan va tirozin ishqoriy muhitda diazoreaktiv bilan sarg‘ish-pushti rangli kompleks birikma hosil qiladi. 2 ta probirka olib, birinchisiga 10 tomchi 1% li oqsil eritmasidan, ikkinchisiga 1% li jelatina eritmasidan tomiziladi. Har ikkala probirkalarga 1 ml dan 10% li natriy karbonat eritmasidan va diazoreaktivdan solib, rang hosil bo‘lishi kuzatiladi. Bir necha daqiqa o‘tgach gistidinning diazoreaktiv bilan sarg‘ish-pushti rangli kompleks birikmasi hosil bo‘ladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 10. Aminokislotalarni qog‘oz xromatografiyasi yordamida ajratish Kerakli reaktivlar va jihozlar: aminokislota aralashmasi , suv bilan to‘yintirilgan fenol eritmasi, ningidrinning 0,1% li ermitasi, aminokislotalar aralashmasining 0,1% li eritmasi . Fil’tr qog‘ozdan uzunligi 12-14 sm va eni 1,5 sm keladigan tasma qirqiladi. Bu tasmaning yuqori tomonidan igna bilan 15-20 sm ip o‘tkaziladi. Qog‘ozning pastki qismidan 1 sm qoldirib, to‘g‘ri chiziq va uning o‘rtasiga diametri 0,5 sm bo‘lgan aylana chiziladi. Aylana o‘rtasiga kapillyar yordamida 2-3 tomchi aminokislota aralashmasi tomiziladi. Tomchi tomizilgan joy havoda quritiladi. Uzunligi 18-20 sm va diametri 2 sm bo‘lgan probirkaning tubiga sekin-astalik bilan probirka devorlariga tekizmasdan suv bilan to‘yintirilgan fenol aralashmasidan 2 ml quyiladi. Tayyorlangan qog‘oz probirkaga tushiriladi, bunda qog‘ozning uchi erituvchiga 2-3 mm botib, qat’iy ravishda vertikal turishi kerak. Probirkani probka bilan berkitib, 40-50 0 S haroratga 1,5-2 soat davomida termostatga qo‘yiladi. Probirkadagi eritma qog‘oz tasma bo‘ylab 10-12 sm ko‘tarilgandan so‘ng xromatogrammani olib, 100 0 S da 10-15 daqiqa davomida quritiladi, keyin qog‘oz tasmani olib, shtativga qo‘yiladi va unga 0,1-0,5%li ningidrin eritmasidan pulverizator yordamida purkaladi yoki kyuvetaga ningidrin eritmasi quyib, unga xromatografik qog‘oz botiriladi. Yana 100 0 S li quritgich shkafiga 5-6 daqiqaga ilib qo‘yiladi. Natijada qog‘ozning aminokislota to‘xtatgan joyi ko‘k, ko‘kish-binafsha rangga bo‘yaladi. Keyin chizg‘ich yordamida har bir aminokislota uchun Rf qiymati aniqlanadi. Ba’zi aminokislotalarning R f qiymatlari (vatman qog‘ozi, №1) № Aminokislota Erituvchi Suv bilan to‘yintirilgan fenol n-butil spirt-muz sirka kislotasi-suv (4:1:1) 1 Fenilalanin 0.87 0.66 2 Lizin 0.82 0.16 3 Arginin 0.90 0.18 4 Gistidin 0.69 0.17 5 Serin 0.36 0.32 6 Treonin 0.47 0.36 7 Glitsin 0.41 0.34 8 Asparagin kislota 0.15 0.33 9 Glutamin kislota 0.25 0.37 10 Tirozin 0.63 0.53 11 Alanin 0.56 0.39 12 Metionin 0.83 0.58 13 Triptofan 0.75 0.62 14 Prolin 0.89 0.50 15 Leysin 0.87 0.72 16 Valin 0.76 0.56 17 Sistein 0.03 0.13 Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 11. Oqsil miqdorini L o uri usulida miqdoriy aniqlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: oqsil eritmasi , A reaktiv – 0,1 n natriy karbonat tuzining natriy gidroksiddagi 0,2% li eritmasi, B reaktiv – mis sulfatning 1% li sitrat natriydagi 0,5% li eritmasi, V reaktiv – 60 ml A eritmasini 1 ml B reaktivi bilan aralashmasi (foydalanishdan oldin aralashtiriladi). Oqsil miqdorini anqlashda qo‘llaniladigan usullaridan eng keng tarqalgani Louri usuli hisoblanib, u o‘ta aniqligi va qulayligi bilan boshqa usullardan farq qiladi. Louri usuli oqsillarning biuret va Folin reaktivlari ta’sirida rangli komplekslar hosil qilish xususiyatiga asoslangan. Kompleks rangining intensivligi tekshirilayotgan eritmadagi oqsil miqdoriga bog‘liq bo‘lib, bu fotokolorimetr yordamida aniqlanadi. Bu usul o‘ta suyultirilgan eritmalar tarkibidagi juda kam miqdordagi oqsillarni ham aniqlashga imkon beradi. Folin reaktivi, hajmi 1 l bo‘lgan kolbaga 50 g natriy volframat, 12,5 g natriy molibdat va 350 ml distillangan suv qo‘shiladi. Kolba sovigach, 25 ml 85% li ortofosfat kislota va 50 ml xlorid kislota qo‘shiladi. Kolbaga qaytar sovitgich ulanib, 10 soat davomida qaynatiladi. So‘ngra yana 75 g magniy sulfat, 25 ml suv, 2-3 tomchi brom qo‘shiladi va 15 daqiqa davomida sovitgichsiz qaynatiladi. Aralashma sovigandan keyin hajmi suv yordamida 500 ml ga yetkaziladi. Eritma tiniq, rangi to‘q sariq bo‘lishi kerak . Probirkaga tarkibida 5-10 mkg oqsil bo‘lgan tekshirilayotgan eritmadan 0,1-0,2 ml olinadi. Uning ustiga 1 ml V reaktividan qo‘shiladi va yaxshilab aralashtirilib, 10 daqiqa qoldiriladi. Aralashma ustiga 0,1 ml Folin reaktividan tezda qo‘shib, chayqatiladi va 30-40 daqiqaga qoldiriladi. Eritma intensivligi fotokolorimetrda (qizil yorug‘lik fil’tri yordamida) yoki spektrofotometrda 750 nm to‘lqin uzunligida o‘lchanadi (bunda qalinligi 1 sm li kyuvetalardan foydalaniladi). Tekshirilayotgan namuna tarkibidagi oqsil miqdori toza oqsil yordamida tayyorlangan kalibrovka chizig‘i bo‘yicha aniqlanadi. Kalibrovka chizig‘ini tuzish: avval ma’lum konsentratsiyaga ega bo‘lgan oqsil eritmalari tayyorlanadi. Buning uchun tayyorlangan oqsil eritmasidan foydalanib, bir qator standart eritmalar ham tayyorlanadi. Ulardagi oqsil 10, 20 ... va h.k. 100 mkg bo‘lishi kerak. Kristall oqsillar, masalan, hayvon albumini, kazein yoki tuxum albuminidan 100 mg olib, 100 ml o‘yuvchi natriyning 0,1 n eritmasida eritiladi. Hajmi 10 ml li 10 dona o‘lchov probirkaga tayyorlangan oqsil eritmasidan ortib boruvchi miqdorda, ya’ni birinchi probirkaga 1 ml ikkinchi probirkaga 2 ml va h.k. 10 ta probirkaga 10 ml oqsil eritmasidan quyiladi. Probirkadagi eritmalar distillangan suv bilan chiziqqa yetkaziladi. Bunda probirkalardagi oqsil miqdori 0,1 mg dan 10 mg gacha boradi. Proibrkadagi eritmalar yaxshilab aralashtiriladi. Oqsil miqdorini aniqlash uchun har bir probirkadan 0,1-0,2 ml olinib yuqorida ko‘rsatilgan reaktivlar qo‘shiladi. Turg‘un rang hosil bo‘lgach FEK yoki spektrofotometr yordamida rang intensivligi aniqlanadi. Tajribalar bir necha marta qaytariladi va olingan o‘rtacha ma’lumotga qarab kalibrovka chizig‘i tuziladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… MURAKKAB OQSILLAR 1. So‘lak tarkibidagi mutsinni aniqlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: so‘lak, aorta to‘qimasi, konsentrlangan sirka kislota, konsentrlangan sulfat kislota,  -naftolning spirtdagi 1% li eritmasi, timolning 1% li eritmasi, shtativ, probirkalar, pipetkalar, shisha tayoqcha, chinni hovoncha, kvars qumi, voronka, fil’tr qog‘ozi. 1-2 ml so‘lak probirkaga yig‘iladi va unga 10-20 tomchi konsentrlangan sirka kislota tomchilab solinadi. Mutsin cho‘kmaga tushgach, cho‘kma ustidagi suyuqlik asta-sekinlik bilan to‘kib tashlanadi, quyqa esa fil’tr qog‘ozda quritiladi. Mutsin quyqasi bilan Molish reaksiyasi o‘tkaziladi. Molish reaksiyasi: mutsin cho‘kmasiga 1-2 tomchi  -naftolning 1% li spirtli eritmasi solinadi. So‘ngra probirka devori bo‘ylab ehtiyotkorlik bilan 20-30 tomchi sulfat kislotaning konsentrlangan eritmasi quyiladi. 2 qavat suyuqlik chegarasida qizg‘ish-binafsha halqa hosil bo‘ladi. Agar  -naftol o‘rniga 1% li timol eritmasi solinsa, unda qizil halqa hosil bo‘ladi. Aorta to‘qimasidan 0,5-1 g olib, ustiga 5 ml 5% li sirka kislota qo‘shiladi va 15 daqiqa davomida chinni hovonchada toza qum yordamida maydalanadi. Olingan gomogenat (ekstrakt) fil’trlanadi va tarkibida glikoproteid bo‘lgan fil’trat bilan uglevod komponentiga Molish reaksiyasi o‘tkaziladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. Gemoglobining gemin guruhini uchun sifat reaksiya Kerakli reaktivlar va jihozlar: qon , vodorod peroksidning 3% li eritmasi, benzidinning 1% li eritmasi, ammoniy yoki kaliy rodanid tuzining 1% li eritmasi, nitrat ikslotaning konsentrlangan eritmasi, xlorid kislotaning 10% li eritmasi , p robirkalar, pipetkalar, shtativ . Gemoglobin vodorod peroksid ta’sirida benzidinning oksidlaydi, natijada eritma ko‘k rangga kiradi, biroz turganda esa u qizaradi. Ushbu reaksiya juda katta sezgirlikka ega. Benzidin reaksiyasi. Birinchi probirkaga 5 tomchi suyultirilgan qon, ikkinchi probirkaga 5 tomchi suv solib, har biriga 5 tomchi 1% li benzidin eritmasi va 5 tomchi vodorod peroksidning 3% li eritmasi quyiladi. Birinchi probirkadagi eritma yashil yoki ko‘k rangga kiradi. Temirni aniqlash. Haroratga chidamli chinni idishchaga 1-2 tomchi qon va 2-4 tomchi nitrat kislotaning konsentrlangan eritmasidan solib, quruq qoldiq qolguncha qizdiriladi. So‘ngra uning ustiga xlorid kislotaning 10% li eritmasidan solib eritiladi va temirga sifat reaksiya o‘tkaziladi. Buning uchun eritmaga 1-2 tomchi ammoniy yoki kaliy rodanid eritmasi solinadi, suyuqlik qizil yoki pushti rangga kiradi. Xulosa. II. MODUL. UGLEVODLAR KIMYOSI UGLEVODLARNI TABIIY MA NBA LARDAN AJRATIB OLISH UGLEVODLARNI AJRATIB OLISH 1. Uglevodlarni quruq mevalar (mayiz, turshak, meva qoqilari) dan ajratib olish Kerakli jihozlar va reaktivlar: maydalab tuyilgan yoki qiymalangan quruq mevalar (mayiz, turshak) 15-50 g miqdorda; 250 ml o‘lchov kolbasi; distillangan suv; universal indikator qog‘ozi; natriy karbonatning 15% li eritmasi; suv hammomi; fil’tr qog‘ozi; qo‘rg‘oshin atsetatning 30% li eritmasi; natriy gidrofosfatning to‘yingan eritmasi. Mahsulotdan vakolatli namuna olinadi. Mayiz, turshak kabi quruq mevalardan qirg‘ichda yoki go‘sht qiymalagichda tuyilgan 15-50 g miqdorda namuna tortib olinadi. Jem yoki murabbo singari mahsulotlardan esa 7-8 g kifoya. Namuna 250 ml li o‘lchov kolbasiga joylashtiriladi va ustiga 130-150 ml miqdorda distillangan suv quyiladi. Kolba yaxshilab chayqatiladi va aralashmaga universal indikator yoki lakmus qog‘ozi botirilib, uning muhiti aniqlanadi. Mevalar tekshirilayotganda muhit, odatda kislotali bo‘ladi va shu sababli ehtiyotkorlik bilan 15% li natriy karbonat eritmasi quyilgan holda pH 7 ga keltiriladi hamda kolba 15-20 minut davomida tez-tez chayqatib turgan holda qaynoq (80 0 S) suv hammomida qizdiriladi. Diqqat! Tarkibida kraxmal saqlagan namunalar (kartoshka, pishmagan olma, nok va h.k.) tekshirilayotganda suv hammomida qizdirish mumkin emas. Aksincha, uglevodlar 1 soat kolbani chayqatib turib sovuq suvda ajratiladi. Shundan so‘ng kolba sovutiladi va ekstraktga 7-15 ml qo‘rg‘oshin atsetatning eritmasidan quyiladi, chayqatiladi va 5-10 minut (oqsillar, pigmentlar, oshlovchi moddalar, shuningdek, qaytaruvchi xususiyatli moddalar cho‘kishi uchun) tinch qoldiriladi. Agar cho‘ktirish to‘liq bo‘lmasa, kolbaga yana 1-5 ml qo‘rg‘oshin atsetat eritmasi quyiladi va chayqatiladi. Ortiqcha qo‘rg‘oshin atsetatni cho‘ktirish uchun 18-20 ml natriy gidrofosfatning to‘yingan eritmasi quyilib, 10-12 minut qoldiriladi. Shundan so‘ng kolba belgisigacha suv bilan to‘ldiriladi, yaxshilab chayqatiladi va buklangan qog‘oz fil’tridan o‘tkaziladi. Fil’tratdan qaytaruvchi xususiyatli uglevodlar aniqlanadi. Fil’tratda, odatda, qaytaruvchi xususiyatli ushlevodlar – glukoza, galaktoza va boshqa monozalar, shuningdek, disaxaridlar – maltoza, laktoza va boshqalar mavjud bo‘ladi. Fil’tratda hatto saxaroza ham bo‘lishiga qarama sdan , uni miqdoriy aniqlash uchun gidrolitik parchalash – inversiya qilish lozim bo‘ladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. Saxarozaning gidrolizi Kerakli jihozlar va reaktivlar: Probirkalar, pipetkalar (sig‘imi 1 ml va 5 ml li), shtativ, gaz gorelkasi yoki spirt lampa, 5% li saxaroza eritmasi, 10% li sulfat kislota eritmasi, 10% li NaOH eritmasi, α –naftol (10% spirli eritma), Selevanov reaktivi, Feling reaktivi. Saxaroza boshqa uglevodlar singari optik aktivlik xususiyatiga ega bo‘lib, qutblangan nur tekisligini o‘ngga buradi. Uning solishtirma burish burchagi +66,5 0 ga teng. Gidrolizga uchratilgandan keyin esa gidrolizatning qutblangan nurni burish yo‘nalishi va burchagi o‘zgarib qoladi. Bu hodisa inversiya deb, hosil bo‘lgan shakar esa inversiyalangan shakar deb yuritiladi. Ikkinchi tomondan, saxaroza qaytaruvchanlik xossasini namoyon qilmagani holda, uning gidrolizati Feling reaktivini qaytaradi. 5% li saxaroza eritmasidan 3 ta probirkaga 1 ml dan quyib, birinchisiga α –naftol bilan, ikkinchisiga rezorsinning 0,05% li eritmasi bilan (Selivanov reaktivi) uchinchisiga Feling reaktivlari bilan tajribalar o‘tkaziladi. Shundan keyin alohida probirkaga 5% li saxaroza eritmasidan 5-10 ml quyib ustiga bir necha tomchi 10% li sulfat kislota qo‘shib qaynatiladi. Gidrolizat sovutilgach, ohistalik bilan neytrallanadi va yuqoridagi reaksiyalar takrorlanadi. Kuzatish natijalari quyidagi jadval ko‘rinishida qayd qilinadi. Kuzatish vaqti Bajariladigan reaksiyalar α–naftol bilan reaksiyasi Selivanov reaksiyasi Feling suyuqligi bilan Izoh Gidrolizgacha Gidrolizdan keyin Eslatma: reaksiya unumiga qarab «+» yoki «-» ishorasi yozib qo‘yiladi. Xulosa: kuzatish natijalari yozib qo‘yiladi. UGLEVODLARNI SIFAT VA MIQDORIY ANIQLASH MONOSAXARIDLARGA XOS SIFAT REAKSIYALARI 1. Uglevodlarni α –naftol yordamida aniqlash Kerakli jihozlar va reaktivlar: probirkalar, glukozaning 0,5% li eritmasi, α - naftolning 0,2 % spirtli eritmasi, konsentrlangan H 2 SO 4 eritmasi. Bu reaksiya hamma uglevodlar uchun xosdir. Uglevodlar konsentrlangan sulfat kislota ta‘sirida furfurol yoki uning hosilalari – 5-(gidroksimetil) furfurolga aylanadi. Hosil bo‘lgan mahsulot 2 mol α - naftol bilan kondensatsiyalanib, rangli kompleks hosil bo‘ladi. Glukozaning 0,5% li eritmasidan 2 ml olib, ustiga 3-4 tomchi α - naftolning 0,2 % spirtli eritmasidan tomiziladi va yaxshilab chayqatiladi. So‘ngra probirka devoridan ohistalik bilan 1 -2 ml konsentrlangan H 2 SO 4 q u yiladi. Sulfat kislota zichligi katta bo‘lgani uchun probirka tagiga cho‘kib, suyuqlik ikki qavatga bo‘linadi. Xuddi shu qavat chegarasida binafsha rang (yoki qizil halqa) hosil bo‘ladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… Aldopent oza Aldogek s oza Furfurol 5- (gidrok si met il) furfurol 2. Fruktozani rezorsin (Selivanov usuli) yordamida aniqlash Kerakli jihozlar va reaktivlar: probirka , rezorsinning 20% li xlorid kislotadagi 0,05% li eritmasi – Selivanov reaktivi , fruktoza ning 0,5% li eritmasi, glukoza ning 0,5% li eritmasi , suv hammomi . Fruktozaga xlorid kislota qo‘shib qizdirilganda oksimetilfurfurol hosil bo‘ladi, bu mahsulot rezorsin bilan pushti-qizg‘ish rangli kompleks hosil qiladi. Bu reaksiya ketogeksozalarni aldogeksozalardan farqlashga imkon beradi. Ikkita probirka olib ularga rezorsinning 20% li xlorid kislotadagi 0,05% li eritmasidan (Selivanov reaktivi) 3 ml dan quyiladi, ularning biriga 0,5 ml fruktoza, ikkinchisiga 0,5 ml glukoza eritmasidan quyiladi. Har ikkala probirka 80 0 S li suv hammomiga 2-3 minut qizdiriladi. Bu vaqtda fruktozali probirkadagi suyuqlik qizil rangga kiradi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. Pentozalarni orsin yordamida aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: probirkalar, suv hammomi (80 0 S), pipetkalar, konsentrlangan sulfat kislota, ribozaning 1-2 % li eritmasi, orsin eritmasi: 0,25 g orsin 125 ml 30% li (zichligi 1,149 g/ml) xlorid kislotada eritiladi, Fe (III) xloridning 10% li eritmasi. Rangli mahsulotRezorsin R – ok simet il furfurolning qoldig’i Pentozalar kislotali muhitda temir (III) xlorid ishtirokida orsin reaktivi bilan yashil rangli kompleks hosil qiladi. Bu reaksiya pentozalarning kislota ta‘sirida furfurolga aylanishini tasdiqlaydi. Probirkaga 1 ml riboza yoki tekshiriluvchi eritma quyilib, unga teng hajmda orsin reaktividan quyiladi. Aralashma qaynayotgan suv hammomida 20 minut qizdiriladi. Agar tekshirilayotgan suyuqlikda pentoza yoki uning hosilasi bo‘lsa probirkadagi eritma yashil rangga kiradi. Orsin Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 4. Dezoksiribozani difenilamin yordamida aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: probirkalar, suv hammomi (80 0 S), pipetkalar, difenilamin eritmasi, dezoksiriboza yoki DNK ning 1% li eritmasi. 2–dezoksipentozaga aromatik amin (difenilamin) qo‘shib asta-sekin qizdirilsa, ko‘k rangli kompleks birikma hosil bo‘ladi. Bu reaksiya yordamida DNK molekulasidagi dezoksiribozani ham aniqlash mumkin. 1 ml dezoksiriboza yoki DNK eritmasiga 2 ml difenilamin eritmasi qo‘shiladi, so‘ngra 10 minut qaynatiladi. Bu vaqtda reaksion aralashma barqaror ko‘k rangga kiradi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 5. Nilander reaksiyasi Kerakli asbob va reaktivlar: glukoza eritmasi, Nilander reaktivi: vismut tuzlarining ishqoriy eritmasi, suv hammomi, shtativ, probirkalar. Turli biologik suyuqliklardagi shakarni aniqlashda ko‘pincha vismut tuzlaridan foydalaniladi, chunki bu tuz mis tuzlaridan farqli o‘laroq boshqa qaytaruvchi moddalar, masalan, urat kislota ta‘sirida qaytarilmaydi. 1-2 ml glukoza eritmasiga 0,5-1 ml Nilander reaktividan qo‘shib, 2 minut davomida ohista qaynatiladi. Avval jigarrang, keyin qora vismut cho‘kmasi hosil bo‘lishi kuzatiladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 6. Barfed reaksiyasi Kerakli asbob va reaktivlar: mis atsetatning nordon eritmasi – Barfed reaktivi, 1% li glukoza eritmasi, laktoza yoki maltoza eritmasi, suv hammomi, probirkalar, pipetkalar. Monosaxaridlar mis atsetatning nordon eritmasi ta‘sirida ham oksidlanadi, bunday sharoitda disaxaridlar amalda oksidlanmaydi. Bu reaksiyani Barfed topganligi uchun shu olim nomi bilan yuritiladi va biologik ob‘ektlardagi bu ikki gruppa shakarlarni bir-biridan farq qilishda qo‘llaniladi. 2 ta probirkaga 5 ml dan Barfed reaktividan quyib, biriga 1% li glukoza eritmasidan 1 ml, ikkinchisiga maltoza yoki laktoza eritmasidan 1 ml qo‘shiladi va suv hammomida 10 minut davomida qizdiriladi. Bu vaqtda birinchi probirkada qizil rangli mis (I) oksid cho‘kmasi hosil bo‘ladi, ikkinchisida disaxarid oksidlanmaganligi sababli qizil cho‘kma hosil bo‘lmaydi. Probirkalardagi suyuqliklarni uzoq qizdirmaslik zarur, aks holda disaxaridlar ham oksidlanib ketadi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 7. Feling reaksiyasi Kerakli asbob va reaktivlar: o‘lchov kolbalari (50, 100, 250), gaz gorelkasi yoki spirt lampasi, glukozaning 1% li eritmasi, Feling reaktivi – ikkita eritma tayyorlanadi: I – 50 ml li kolbaga CuSO 4 *5H 2 O dan 3,464 g solinadi va belgisigacha suv quyiladi; II – 50 ml distillangan suvda 43,25 g Segnet tuzi (COOK-CHOH-CHOH-COONa*4H 2 O) eritiladi. Eritma 250 ml li o‘lchov kolbaga o‘tkazilib, ustiga 50 ml NaOH ning kons. eritmasi quyiladi va belgigacha suv to‘ldiriladi. Ikkala eritma alohida saqlanadi va bevosita tajriba oldidan 1:1 nisbatda aralashtirilib, ishlatiladi. Uglevodlarning qaytaruvchanlik xossasini aniqlash uchun ko‘p hollarda Feling reaktividan foydalaniladi. Bu reaktiv tarkibidagi ikki valentli mis ioni Segnet tuzi (vino kislotaning natriy- kaliyli tuzi) molekulasida bog‘langan holatda bo‘lib, oksidlanish-qaytarilish reaksiyasiga erkin kirisha oladi. Reaksiya mexanizmi Trommer reaksiyasi bilan bir xil bo‘lib, faqat aniqlashga halaqit berishi mumkin bo‘lgan mis (II) oksid hosil bo‘lmaydi. Bu reaksiya asosida glukozani miqdoriy jihatdan aniqlash usuli ham ishlab chiqilgan. Probirkaga 1% li glukoza eritmasidan 1-2 ml quyib, unga teng hajmda Feling reaktividan qo‘shiladi va aralashma ohistalik bilan qaynaguncha qizdiriladi. Reaksiya natijasida qizil rangli mis (I) oksid cho‘kmasi hosil bo‘lishi kuzatiladi. Bu reaksiyani boshqa uglevodlar maltoza, laktozalar ham hosil qiladi, saxaroza va kraxmal bilan esa qizil cho‘kma hosil bo‘lmaydi, chunki ular qaytaruvchanlik xossasiga ega emas. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 8. Polisaxaridlarga xos rangli reaksiyalar Kerakli asbob va reaktivlar. Probirkalar (1,5 ml li); pipetkalar, shtativ, gaz gorelkasi yoki spirt lampa, 0,1% li kraxmal eritmasi, 0,1% li glikogen eritmasi, Lugol eritmasi, 10% li NaOH eritmasi etil spirti. Kraxmal yod bilan ko‘k rang beradi. Bu reaksiya o‘ziga xos reaksiya bo‘lib, kraxmal tarkibidagi amilazaning poliglukozid zanjiri spiralsimon strukturaga ega bo‘lib, yod spiral o‘rtasidagi bo‘shliqqa kiradi va koordinatsion kompleks hosil qiladi. Shuning uchun kraxmal gidrolizga uchratilsa yoki spirt quyilsa ko‘k rang yo‘qoladi, shunday hodisa qizdirilganda ham kuzatiladi, lekin eritma sovitilganda ko‘k rang yana hosil bo‘ladi. Probirkaga 0,1% li kraxmal eritmasidan 3 ml quyib, ustiga 2-3 tomchi Lugol eritmasidan tomiziladi. Hosil bo‘lgan ko‘k rangli eritmani uch qismga bo‘lib, biriga teng hajmda 10% li natriy gidrooksid eritmasi, ikkinchisiga shuncha miqdorda etil spirt qo‘shiladi, uchinchisini esa qaynatiladi. Bu vaqtda uchala probirkadagi suyuqlik rangsizlanadi. Lekin oxirgi probirkadagi suyuqlik sovitilgandan so‘ng ranggi tiklanadi. Alohida probirkaga 2-3 ml glikogen eritmasi quyib, unga 2-3 tomchi Lugol eritmasidan tomiziladi. Probirkadagi suyuqlik qizil-qo‘ng‘ir rangga kirishi kuzatiladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 9. O‘simliklarning yashil barglaridagi kraxmalni aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: probirka; 1, 2, 5 ml li pipetka, gaz gorelkasi yoki spirt lampa, etil spirt, yodning 1% li eritmasi, o‘simlik bargi. Kraxmal faqat yashil barglarda aniqlanishi mumkin, sarg‘aygan barglarda xlorofill bo‘lmaganligi sababli kraxmal sintezlanmaydi. 2 ta probirka olib, ularning biriga o‘simlikning yashil bargi, ikkinchisiga sarg‘aygan bargi solinadi. Har ikkala probirkaga 1-2 ml distillangan suv quyib, 2-3 minut qaynatiladi. So‘ngra issiq suv to‘kib tashlanadi va uning o‘rniga 1 ml etil spirt quyiladi. Probirkalar qaynab turgan suv hammomiga 3-5 minut quyiladi va har minutda chayqatib turiladi. Yashil bargdagi xlorofill va sariq bargdagi ksantofill spirtga o‘tadi, barg esa rangsizlanadi. Spirtli ekstrakt alohida idishga quyiladi. Rangsizlangan bargli probirkaga esa yana 1 ml dan spirt quyib, 3-5 minut suv hammomida qizdiriladi. Spirt yuqoridagi idishga to‘kilib, rangsiz barg bir necha marta distillangan suv bilan yuviladi. Shundan keyin har bir probirkaga 3-4 ml dan distillangan suv quyib, barg to‘qimasini yumshatish uchun qaynab turgan suv hammomiga quyiladi. 5-10 minutdan keyin suv to‘kib tashlanadi va barglar alohida nomerlangan fil’tr qog‘ozga quyiladi, so‘ngra 3-4 tomchi 1% li yod eritmasidan tomiziladi. Agar bargda kraxmal bo‘lsa, sekin-asta ko‘k nuqtalar paydo bo‘lib, bargning yuzasi ko‘karadi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 10. Piyoz ekstraktidagi glukoza va boshqa qaytaruvchi shakarlarni aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: qirg‘ich yoki pichoq, gaz gorelkasi, probirka, Feling suyuqligi, piyoz. Bosh piyozning suvli ekstrakti Feling reaktivi bilan qizdirilganda avval sariq rangli mis (I) gidroksid, so‘ngra qizil rangli mis (I) oksidi hosil bo‘ladi. Bu reaksiya ekstraktda glukoza va boshqa qaytaruvchilik xususiyatiga ega moddalar borligiga asoslangan. Bosh piyoz qirg‘ichda yoki boshqa usulda yaxshilab maydalanadi. Tayyorlangan massadan probirkaga 0,5 g olib, uning ustiga 2 ml distillangan suv quyiladi va 3-4 minut qaynatiladi. So‘ngra qog‘oz fil’tr orqali fil’trlanadi. Fil’tratdan 10 tomchi olib Feling reaksiyasi yordamida qaytaruvchi shakarlar borligi aniqlanadi. Piyoz o‘rniga sabzidan ham foydalanish mumkin. Har ikkala ish natijasi jadval ko‘rinishida ifodalaniladi. Tekshiriladigan material Foydalanilgan reaktivlar Kuzatilgan rang Reaksiya nimaga bog‘liq Piyoz Sabzi 11. Kraxmalni miqdoriy aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: suv hammomi, 200 ml li o‘lchov kolbasi, qaytar sovitgichli 200 ml hajmli konussimon kolba, chinni hovoncha (diametri 60 mm), 5 va 10 ml li darajalangan pipetkalar, 25 ml li Mor pipetkasi, 25 va 50 ml li to‘g‘ri kranli byuretka, 100 ml li o‘lchov silindri, shisha plastinka, shisha tayoqcha, xlorid kislotaning 25% li eritmasi, NaCl ning 10% li eritmasi, yodning 0,1 n. eritmasi, natriy tiosulfatning 0,1 n. eritmasi (yuqori aniqlikda tayyorlanishi kerak), NaCl ning 0,5 n. eritmasi, H 2 SO 4 ning 2 n. eritmasi, kraxmalning 1% li eritmasi, Lugol eritmasi. Kraxmalni miqdoriy jihatdan aniqlash so‘lak amilazasi yordamida fermentativ yo‘l bilan parchalanganda hosil bo‘ladigan glukozani Vilshtetter va Shudl usuli bo‘yicha yodometrik titrlashga asoslangan. Kraxmalni ekstraksiya qilish uchun 5 g kartoshka (yoki boshqa kraxmali bor modda) chinni hovonchada yaxshilab maydalanib, sig‘imi 200 ml li o‘lchov kolbasiga solingan 30-50 ml distillangan sovuq suvdan o‘tkaziladi, so‘ngra ustiga darhol 100 ml distillangan issiq suv quyiladi va qaynab turgan suv hammomiga 1 soat quyiladi. Kolbadagi suyuqlik chayqatilib, aralashtirilib turiladi. Shundan keyin kolbani suv hammomidan olib, 40 0 S gacha sovitiladi va uning ustiga 10 ml so‘lak eritmasi, 5 ml 10% li natriy xlorid eritmasidan qo‘shib, 37-40 0 S li suv hammomiga (kartoshka bilan ishlaganda 2-3 soat, g‘alladoshlar kraxmali aniqlanganda 12-18 soat) inkubatsiyaga qo‘yiladi. Kraxmalning gidrolizlanish darajasi va tamom bo‘lish vaqti uning yod bilan reaksiyasi yordamida aniqlanadi. Buning uchun kolbadagi aralashmadan shisha tayoqcha yordamida qattiq zarrachalar tutgan bir tomchi suyuqlik olinib buyum oynasiga tomiziladi va bir necha tomchi Lugol eritmasi qo‘shiladi. Agar ko‘k rang hosil bo‘lmasa, kolbaning o‘lchov belgisiga qadar suv bilan to‘ldirib, yaxshilab aralashtirgach, quruq fil’tr orqali fil’trlanadi. Amilaza ta’sirida hosil bo‘lgan dekstrinlar va maltoza 2,5% li HCl eritmasi bilan Qizil- g’isht sim on cho’k maKo’k erit ma gidrolizlanadi. Buning uchun 100 ml fil’trat 200 ml li konussimon kolbaga quyiladi. Uning ustiga 12 ml 25% li xlorid kislota eritmasidan quyilib, kolba og‘ziga qaytar sovitgich (yoki uzunligi 80 sm bo‘lgan shisha nay) o‘rnatgan holda qaynab turgan suv hammomiga 3 soat qo‘yiladi. Gidroliz tamom bo‘lgach kolba sovutiladi, eritma esa 200 ml li o‘lchov kolbasiga o‘tkaziladi, gidroliz olib borilgan kolba bir necha marta suv bilan chayqatib qo‘yiladi va umumiy hajm 200 ml ga yetkaziladi. Suyuqlik tarkibidagi glukoza yodometrik yo‘l bilan aniqlanadi. Gidrolizatdan 10 ml olib, ustiga 0,1 n. yod eritmasidan 15 ml quyiladi va yaxshilab chayqatib turgan holda to yod ranggi yo‘qolguncha 0,5 n. NaOH eritmasidan sekin-asta 25 ml quyiladi, 10- 15 minutdan keyin 2 n. sulfat kislota eritmasidan 5 ml qo‘shiladi va ajralgan yod 0,1 n. tiosulfat eritmasi bilan titrlanadi. Eritma sariq rangga kirgandan so‘ng har 50 ml hajmga 1% li kraxmal eritmasidan 1 ml tomiziladi. Parallel ravishda gidrolizat o‘rniga teng miqdorda suv quyib kontrol qilinadi. Tekshirilayotgan mahsulotdagi kraxmal miqdori quyidagi formula yordamida foizlarda hisoblab chiqiladi:C = (V − V 1)⋅V 2⋅0,009 ⋅100 ⋅0,9 a⋅V 3 bu yerda: V – ko n trolni titrlash uchun sarflangan 0,1 n. tiosulfat eritmasining miqdori (ml); V 1 – tajriba uchun sarflangan 0,1 n . tiosulfat eritmasi miqdori ( ml ); 0,009 – titrlash natijasini glukoza miqdoriga o ‘ tkazish uchun koeffitsient ; f - tekshirilayotgan material miqdori ( g ); 0,9 – glukozani kraxmalga qayta hisoblash uchun koeffitsient ; V 2 – o ‘ simlik mahsuloti ekstraktining hajmi (400 ml ), V 3 – yodometrik titrlash uchun olingan aralashmaning hajmi ( ml ). Kartoshkada har xil uglevodlar miqdori oz , shuning uchun ularni hisobga olmasdan , topilgan glukoza miqdorini kraxmalga aylantirib , topish mumkin . Boshqa mahsulotlarda (pishmagan olma, barglar, poyalarda) uglevodlar miqdori e‘tiborga olarlik darajada bo‘ladi. Bu holatda kraxmal miqdorini aniq topish uchun, alohida qaytaruvchi mono- va disaxaridlarni aniqlab, olingan qiymatni glukoza miqdoridan chiqarish va undan keyin kraxmalga aylantirish kerak.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… III. MODUL. NUKLEIN KISLOTALAR KIMYOSI NUKLEIN KISLOTALARNI TABIIY MANBALARDAN AJRATIB OLISH NUKLEOPROTEIDLARNI AJRATIB OLISH VA GIDROLIZ REAKSIYALARINI O‘RGANISH 1. Achitqidan nukleoproteidlarni ajratib olish va gidrolizlash Kerakli asbob va reaktivlar: chinni hovoncha, pipetka, laboratoriya sentrifugasi, sentrifuga tarozisi, shisha tayoqcha, 25-30 sm uzunlikdagi shisha nay yoki qaytar sovitgich, gaz gorelka yoki spirt lampa, sentrifuga probirkalari, kimyoviy probirkalar, efir (dietil efir), 5% li sirka kislota H 2 SO 4 ning 10% li eritmasi, NaOH ning 0,4; 10; 30% li eritmalari, CuSO 4 ning 1; 7% li eritmasi, konsentrlangan ammiak eritmasi, molibden reaktivi, toza qum, quritilgan achitqi. Nukleoproteidlarning kimyoviy tarkibini o‘rganish uchun qulay ob‘ekt achitqi hujayralari hisoblanadi. Quruq achitqi massasi yoki undan ajratib olingan nukleoproteidni sulfat kislota yordamida gidrolizlansa, polipeptidlarga, purin va pirmidin asoslariga, uglevod komponentiga va fosfat kislotaga parchalanadi. Gidroliz mahsulotlarini spetsifik sifat reaksiyalar yordamida aniqlash mumkin. Polipeptidlar biuret reaksiyasi yordamida aniqlanadi. Purin asoslarini kumush oksidining ammiakli eritmasi, uglevodlarni Trommer yoki Feling reaktivlari, fosfat kislotani esa ammoniy molibdat yordamida aniqlash mumkin. 1-bosqich. Achitqidan nukleoproteidlarni ajratib olish Chinni hovonchaga 1 g achitqi solib, uning ustiga 1-2 tomchi efir, 4-5 tomchi suv tomiziladi va 0,2-0,4 g qum solinadi, so‘ngra 1-2 minut tuyuladi. Shundan so‘ng aralashma ustiga o‘yuvchi natriyning 0,4% li eritmasidan 4 ml quyib, yana 5 minut tuyuladi. Hovonchadagi massa sentrifuga probirkasiga solinadi, ikkinchi shunday probirkaga suv quyib, sentrifuga tarozisida tenglashtiriladi va 10 minut sentrifugalanadi. Sentrifugat pipetka yordamida toza hovonchaga o‘tkaziladi va shisha tayoqcha yordamida, aralashtirib turgan holda 5% li sirka kislota eritmasidan 1,5 ml quyiladi. Bunda nukleoproteid cho‘kmasi hosil bo‘ladi. Hovonchadagi aralashma pipetka yordamida sentrifuga probirkasiga o‘tkaziladi va 10 minut sentrifugalanadi. Sentrifugat to‘kib tashlanadi, nukleoproteid cho‘kmasi esa gidrolizlanadi. 2-bosqich. Nukleoproteidlarni gidrolizlash Probirkaga nukleoproteid cho‘kmasi (yoki 100 mg quritilgan achitqi) solinib, ustiga 10% li sulfat kislotasi eritmasidan 4 ml quyiladi. Probirka og‘zi sovitgich sifatida uzun rezina nay (25- 30 sm) o‘tkazilgan probka bilan berkitiladi va asbest to‘rga qo‘yib, kuchsiz alanga yoki elektr plitkasida qizdiriladi. Aralashma bir soat qaynatilgandan keyin qizdirish to‘xtatiladi va sovitiladi, so‘ngra fil’trlanadi. Fil’trat bilan polipeptidlar, purin asoslariga, riboza va fosfat kislotaga xos quyidagi reaksiyalar qilib ko‘riladi: a) polipeptidlarga xos Biuret reaksiya. Probirkaga 5 tomchi gidrolizat olib, unga 10% li o‘yuvchi natriy eritmasidan 10 tomchi va 1% li mis (II) sulfat eritmasidan 1 tomchi qo‘shib, chayqatiladi. Suyuqlik pushti-binafsha rangga bo‘yaladi. b) purin asoslariga xos kumush tuzlari bilan qilinadigan reaksiya. 10 tomchi gidrolizatdan olib, uni konsetrlangan ammiakning 1 tomchisi bilan neytrallanadi va unga 1% li kumush nitrat eritmasidan 5 tomchi qo‘shiladi. 3-4 minutdan keyin purin asoslarining kumushli qoramtir cho‘kmasi paydo bo‘ladi. v) riboza va dezoksiribozaga xos Trommer reaksiyasi. 5 tomchi gidrolizat olib unga 30% li NaOH eritmasidan 10 tomchi qo‘shib, mis (II) gidroksid loyqasi hosil bo‘lguncha 7% li mis (II) sulfat eritmasidan tomiziladi. Suyuqlikni aralashtirib, qaynaguncha qizdiriladi. Riboza yoki dezoksiriboza mis (II) oksidini qizil rangli mis (I) oksidiga qaytarganligi uchun qizg‘ish loyqa hosil qiladi. g) fosfat kislotaga xos molibden bilan qilinadigan reaksiya. 20 tomchi molibden reaktiviga 2-3 tomchi gidrolizat qo‘shib, bir necha minut qizdiriladi. Agar gidrolizatda fosfat kislota bo‘lsa, suyuqlik limon sarig‘i rangiga kiradi. Sovitilganda sariq kristall cho‘kma paydo bo‘ladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. O‘simlik to‘qimalaridan DNK ni ajratib olish Kerakli asbob va reaktivlar: chayqatgich apparat, sovitgichli sentrifuga, ajratgich voronka, pH-metr LPU-0,1, 100; 200 ml li o‘lchov silindrlari, shlifli, qopqoqli kolba, pipetka, hovoncha, probirka, 37 0 S li termostat, «A» eritma: tarkibida 0,1 M EDTA, 1M dodetsilsulfat (DDS) bor, natriy xloridning 0,15 M eritmasi (pH=7,0), «B» eritma tarkibida 0,1 M EDTA, 2% DDS bor, natriy xloridning 0,15 M eritmasi (pH=6,0), «V» eritma tarkibida 0,1 M EDTA, 5% DDS bor, natriy xloridning 0,15 M eritmasi (pH=8,0), 96% li etanol, 78% li etanol, suvga to‘yintirilgan fenol, fenol-xloroformning 1:1 nisbatdagi aralashmasi, NaCl ning 0,15 M va 0,015 M eritmalari, papain (tarkibida 0,005 M EDTA bor 88 mkg/ml eritma, pH=6,5), tripsin (1 mkg/ml, pH=7,2), pronaza (500 mkg/ml, pH=8,0), tripsin (375 mkg/ml); papain (50 mkg/ml), RNK-aza (50 mk/ml), tarkibida 1,5 M natriy sitrat bor 0,015 M NaCl eritmasi, tarkibida 0,001 M EDTA bo‘lgan natriy atsetatning 3 M eritmasi, propanol. O‘simlik to‘qimalaridan DNK ni ajratib olishda tekshiriladigan ob‘ektlarni gomogenlash, eritmadan nukleoproteinni ekstraksiyalash, olingan preparatni oqsilsizlantirishda qo‘llaniladigan usullarni tanlash katta ahamiyatga ega. Quyida o‘simlik materiallaridan yuqori molekular DNK ajratib olishning optimal varianti keltirilgan. Suyuq azotda fiksatsiya qilingan 100 g piyozning meristema to‘qimasini hovonchada bir xildagi mayin kukun hosil bo‘lguncha maydalab, uning ustiga tarkibida 1 ml fenol bo‘lgan 100 ml eritma qo‘shiladi va yana bir xil massa hosil bo‘lguncha maydalanadi. Hosil bo‘lgan gomogenat 100 ml fenol bilan chayqatiladi. Tayyor bo‘lgan aralashma 0 0 S da 20 minut 6000 ayl/min (10000 g) tezlikda sentrifugalanadi. Bu vaqt sentrifuga probirkasida 3 ta qavat hosil bo‘ladi; probirka tubida fenol, uning o‘rtasida oqsil va maydalangan o‘simlik to‘qimalari, yuqori qismi esa tarkibida DNK bor suvli qavat, o‘rta qavat olinib, «A» eritma bilan yuqoridagidek ekstraksiya qilinadi. Bu operatsiya suv qavatida DNK qolmaguncha davom ettiriladi. Shundan keyin o‘simlik to‘qimasining qoldig‘i «B» va «V» eritmalari bilan yuqoridagicha yana ekstraksiya qilinadi. Eritmadagi DNK ma‘lum miqdordagi ekstraktga 96% li spirt quyilganda cho‘kma hosil bo‘lishiga qarab aniqlanadi. Oqsilsizlantirish. Olingan DNK ekstraktini oqsilsizlantirish quyidagicha olib boriladi. Ekstraktga teng miqdorda xloroform-fenol (1:1) aralashmasini quyib, 20 minut chayqatiladi, so‘ngra yuqoridagi sharoitda sentrifugalanadi. Sentrifugatning suvli qavatini ajratib olib, unga ikki hajm 96% li etanol qo‘shib, DNK cho‘ktiriladi. Cho‘kmada fenol va DDS ni yo‘qotish uchun 5-7 marta 70% li etanol bilan yuviladi. Cho‘kma 0,15 M NaCl da eritilgach, quyidagi usullarning biri yordamida oqsilsizlantiriladi: 1) papain (800 mkg/ml)+0,005 M EDTA (pH=6,5) bilan 37 0 S da 2 soat davomida inkubatsiya qilish; 2) tripsin (1 mkg/ml) bilan (pH=7,2) 37 0 S da 1 soat davomida inkubatsiya qilish; 3) pronaza (500 mkg/ml) bilan (pH=8,0) da xona temperaturasida bir sutka davomida inkubatsiya qilish; 4) 1 soat 37 0 S da tripsin (375 mkg/ml) bilan inkubatsiya qilish, so‘ngra yuqoridagidek xloroform-fenol aralashmasi bilan ishlash. Shundan so‘ng eritmadan DNK 96% li etil spirt yordamida cho‘ktiriladi. Buning uchun aralashmaga 1:2 nisbatda etil spirt qo‘shiladi. 5) olingan cho‘kma 5-7 marta 70% li etanol bilan yuviladi. DNK cho‘kmasi bufer eritmada eritiladi va papain bilan (50 mkg/ml) 37 0 S da 1 soat inkubatsiya qilinadi. Eritmadagi DNK 96% li etanolda cho‘ktirilgach, 0,15 M natriy xloridda eritiladi. RNK va polisaxaridlardan tozalash. Buning uchun DNK eritmasining pH i HCl yordamida 5,0 ga keltiriladi. RNK-aza eritmasidan oz miqdordagi DNK-aza aralashmasini yo‘qotish uchun dastlab 10 minut 80 0 S da qizdiriladi. So‘ngra DNK eritmasi RNK-aza bilan (50 mkg/ml) 37 0 S da 1 soat inkubatsiya qilinadi. Shundan keyin DNK eritmasi yana fenol-xloroform aralashmasi bilan yuqoridagidek ishlanadi va DNK 1:2 hajmdagi etanol bilan cho‘ktiriladi. DNK cho‘kmasi tarkibida 1,5 mM natriy sitrat bo‘lgan 0,015 M natriy xlorid eritmasida eritiladi va unga tarkibida 0,001 M EDTA bo‘lgan 3 M (pH=7,0) natriy atsetat (1:10) qo‘shiladi. Olingan eritmaga doimiy aralashtirib turgan holda tomchilatib 0,5-0,54 hajm izopropanol qo‘shiladi. Bu vaqtda faqat DNK cho‘kib, RNK parchalanadi va polisaxaridlar eritmada qoladi. DNK cho‘kmasi 70% li etanolda 5 0 S da saqlanadi. Ajratib olingan DNK preparatlarining xossasiga qaraganda pronaza yordamida oqsilsizlantirish eng optimal variant hisoblanadi. Quyidagi jadvalda ajratib olingan DNK ning fizik-kimyoviy xossalari keltirilgan. № Oqsilsizlantiruvchi agent Sedimentatsiya konstantasi,(S) Oqsil miqdori, (%) Giperxrom effekti,(%) 1 Papain 21,2 3,0 24,0 2 Tripsin 26,8 2,1 25,0 3 Pronaza 27,5 0,93 33,3 4 Tripsin va papain 21,7 1,5 24,0 Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. Buqoq bezi yoki qora taloq, to‘qima dezoksiribonukleo-protei d ini ajratish Kerakli asbob va reaktivlar: buqoq bezi yoki qora taloq to‘qimasi, natriy xloridning 5 % li eritmasi, natriy gidroksidning 0,4 va 10 % li eritmalari, mis (II) sulfatning 1 % li eritmasi, difenilamin reaktivi, distillangan suv, shisha kukuni, probirkalar, shtativlar, chinni hovonchalar, voronkalar, shisha tayoqchalar, 100-150 ml li kimyoviy stakan, doka fil’trlar, suv hammomi, tarozi, qadoq toshlari, 25 va 100 ml li o‘lchov silindrlar. Dezoksiribonukleoproteidni buqoq bezi to‘qimasidan ajratib olish . Dezoksiribonukleoproteidni buqoq bezi to‘qimasidan ajratib olish uning ishqoriy va tuzli eritmalarda yaxshi erib, suvda erimasligi va shuning uchun ishqoriy eritmalarni neytrallaganda yoki tuzli eritmalarni suyultirilganda DNP cho‘kmaga tushishiga bog‘liq. Dezoksiribonukleoproteid (DNP) tarkibidagi DNK ni dezoksiribozani ochadigan sifat reaksiya orqali topish mumkin. Buning uchun DNP difenilamin reaktivi bilan qizdiriladi. Natijada DNP gidrolizlanib, dezoksiriboza ajraladi va difenil reaktivi bilan ko‘k rang hosil qiladi. DNP tarkibidagi oqsil esa biuret reaksiyasi yordamida ochiladi. DNP ni ajratish. Buqoq bezi yoki qoratalo q dan 0,5 g olib 100 mg shisha kukuni qo‘ shiladi va 15 ml 5 % li natriy xlorid eritmasidan o h istalik bilan chinni hovonchaga solib ish q alanadi. Bir xil h olatga keltirilgan aralashma doka fil’trdan o‘tkaziladi. S o‘ ngra stakanga shisha tayo q cha bilan asta-sekin aralashtirilgan h olda 80 - 90 ml fil’trdan o‘tkazilgan suyuqlik solinadi. Suvda eri- maydigan DNP cho‘kmaga tushadi, uning cho‘kma-ipchalari shisha tayo q chaga o‘ raladi va toza probirkaga shisha tayo q cha orqali asta o‘tkaziladi. DNP ipchalari 1 - 2 ml 0,4 % li natriy gidroksid eritmasi bilan eritiladi (DNP ipchalarini t o‘ li q erishini kuzating). DNK ni aniqlash. 5 - 10 tomchi DNP eritmasiga ikki marta ko‘p h ajmda difenilamin reaktivi solinadi va probirka 5 - 10 da q i q aga qaynab turgan suv h ammomiga quyiladi. Eritma sekin-asta k o‘ k rangga kiradi, chunki difenilamin dezoksiriboza bilan reaksiyaga kirishadi. DNP tarkibidagi oqsilni aniqlash. 5 - 10 tomchi DNP eritmasiga 10 tomchi 10 % li natriy gidroksid eritmasi va 1 tomchi 1 % li mis sulfat eritmasi solib biuret reaksiyasi o‘tkaziladi. K o‘ kimtir-binafsha rang hosil bo‘lishi oqsil borligini isbotlaydi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… NUKLEIN KISLOTALARNI SIFAT VA MIQDORIY ANIQLASH 1. Hayvon to‘qimalaridagi DNK miqdorini aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: laboratoriya sentrifugasi, suv hammomi, shisha tayoqcha, K’eldal kolbasi, 50 ml li o‘lchov silindri, darajalangan o‘lchov probirkasi, fotoelektrokolorimetr, probirka, shtativ, muz hammomi, NaOH ning 1 n. eritmasi, NaCl ning 20% li sirka kislotadagi to‘yingan eritmasi, etil spirt, trixlor sirka kislotaning 5% li eritmasi, konsentrlangan sulfat kislota, 30% li vodorod peroksid, NaOH ning 30% li eritmasi, universal indikator qog‘oz, ammoniy molibdatning 5% li eritmasi, gidroxinonning 1% di eritmasi, karbonat-sulfat aralashmasi, tarkibida 1 mkg/ml fosfor bor KH 2 PO 4 ning standart eritmasi, jigar yoki taloq, perxlorat kislotaning 0,5 n. eritmasi, Dishe reaktivi, 0,2 mg/ml konsentratsiyali dezoksiribozaning standart eritmasi. DNK A.S. Orlov va Ye.I. Orlova usuli bo‘yicha miqdoriy jihatdan aniqlanadi. Bu usulning mohiyati shundaki, tekshiriladigan to‘qima ishqoriy muhitda gidrolizlangandan keyin, NaCl ning sirka kislotadagi to‘yingan eritmasi quyilganda oqsillar cho‘kib, eritmada DNK va tarkibida fosfor bor boshqa moddalar qoladi. DNK ni boshqa fosforli birikmalardan spirt yordamida cho‘ktirib, ajratib olinadi. To‘qimadagi DNK miqdorini, undagi fosfor yoki dezoksiribozaga qarab aniqlash mumkin. 1-bosqich. Jigar yoki qora taloqni ishqor ta‘sirida gidrolizlash 100 mg to‘qima sentrifuga probirkasiga solinib, uning ustiga 1 ml 1 n. NaOH eritmasidan quyib, qaynab turgan suv hammomiga 15 minut qo‘yiladi. Vaqti-vaqti bilan probirkadagi aralashma shisha tayoqchya bilan aralashtirib turiladi. Shu vaqt ichida to‘qima to‘la erib ketadi. 2-bosqich. Oqsillar va DNK ni cho‘ktirish Gidrolizat asta-sekin avvalo xona temperaturasigacha, so‘ngra muz yordamida 0 0 S gacha sovitiladi. Uning ustiga NaCl ning 20% li sirka kislotadagi to‘yingan eritmasidan 0,5 ml qo‘shib, oqsil cho‘ktiriladi. 5 minutdan keyin aralashma 5 minut 3000 ayl/min tezligida sentrifugalanadi. Sentrifuga probirkalaridan biriga 6 ml etil spirt quyib, sovitib qo‘yiladi. Sovitilgan spirt ustiga sentrifugat (cho‘kma ustidagi suyuqlik) qo‘yiladi: bu vaqtda DNK cho‘kadi, RNK va tarkibida fosfor bor boshqa birikmalar spirtli eritmasida qoladi. DNK ni to‘laroq cho‘ktirish uchun, sentrifugalanganda olingan oqsil cho‘kmasini 1 ml 1 n. li NaOH da (sovitilgan) eritiladi va tezda NaCl ning 20% li sirka kislotadagi to‘yingan eritmasidan 0,5 ml qo‘shib, qaytadan cho‘ktiriladi. Aralashma 5 minut 5000 ayl/min tezligida sentrifugalanadi. Sentrifugat birinchi DNK cho‘ktirilgan spirli aralashmaga quyiladi. Probirkadagi suyuqlik yaxshilab aralashtirilgach, DNK ni to‘laroq cho‘ktirish uchun muz hammomiga 1 soat qoldiriladi. Bir soatdan keyin probirkadagi aralashma 5 minut yuqori tezlikda, 5000 ayl/min tezligida sentrifugalanadi; sentrifugat to‘kib tashlanadi. DNK cho‘kmasi esa 2 marta 5% li trixlorsirka kislota bilan yuviladi. DNK miqdorini uning tarkibidagi fosforga yoki dezoksiribozaga qarab aniqlash mumkin. 3-bosqich. DNK ni fosfor bo‘yicha miqdoriy aniqlash Ajratib olingan DNK kuydirilganda (minerallashtirish) fosfat erkin holatda ajraladi. Qaytaruvchi ishtirokida fosfatni ammoniy molibdat bilan reaksiyasida hosil bo‘lgan molibden ko‘kini kolorimetrik aniqlash mumkin, chunki rangning ravshanlik darajasi fosfor miqdoriga bog‘liq bo‘ladi. Trixlor sirka kislota bilan yuvilgan DNK batamom K’eldal kolbasiga o‘tkazilib, ustiga 1,5 ml konsentrlangan sulfat kislota qo‘shiladi va tiniq suyuqlik hosil bo‘lguncha minerallashtiriladi. DNK ni kuydirishni tezlashtirish uchun 30% li vodorod peroksid qo‘shiladi. Minerallashtirish tugagandan keyin K’eldal kolbasidagi suyuqlik konussimon kolbaga o‘tkazilib, 30% li NaOH eritmasi yordamida (universal indikator bo‘yicha) neytrallanadi. So‘ngra suyuqlik 50 ml li o‘lchov kolbasiga o‘tkaziladi va belgi chiziqqacha distillangan suv quyib, hajmi 50 ml ga yetkaziladi. Kolbadan 5 ml suyuqlik olib, 10 ml li darajalarga bo‘lingan o‘lchov probirkaga quyiladi, unga 5% li ammoniy molibdat eritmasidan 0,5 ml va 1% li gidroxinon eritmasidan 0,5 ml qo‘shiladi. 5 minutdan keyin probirkaga 2 ml karbonat-sulfit aralashmasidan qo‘shib, suv bilan umumiy hajm 10 ml ga yetkaziladi. 10 minutdan keyin rangli eritmaning optik zichligi fotoelektrokolorimetrda qitzil- svetofil’trda (600 nm) aniqlaniladi. Optik zichligi aniqlangach tekshirilayotgan ob‘ektdagi fosforning miqdorini darajalash egri chizig‘i yordamida hisoblab topish mumkin. Darajalash egri chizig‘i chizish uchun 1 ml eritmada 1; 2; 3; 4 mkg fosfor bo‘ladigan KH 2 PO 4 ning standart eritmalari tayyorlanadi. Shu standart eritmalar bilan yuqoridagi rangli reaksiya qilinib, ularning optik zichligi FEK da aniqlanadi. Absissa o‘qiga standart eritmalarning konsentratsiyasi, ordinata o‘qiga optik zichlik (FEK ko‘rsatkichi) qo‘yiladi. Tekshirilayotgan ob‘ektdagi fosfor miqdoriga k‘ora DNK miqdorini quyidagi formula yordamida hisoblab topish mumkin:x= a⋅50 ⋅10 ,1 5 bu yerda: a – darajalash egri chizig‘i asosida topilgan fosfor miqdori (mkg); 50 – minerallashtirilgan DNK ning umumiy hajmi (ml); 10,1 – fosfor miqdorini DNK ga o‘tkazish uchun koeffitsient; 5 – rangli reaksiya uchun olingan gidrolizat. 4-bosqich. DNK miqdorini dezoksiribozaga xos rangli reaksiya asosida aniqlash Trixlorsirka kislota bilan yuvilgan DNK cho‘kmasiga 0,5 n. NaOH eritmasidan 0,5 ml qo‘yib, probirka og‘zini uzun gaz o‘tkazgich shisha naycha o‘rnatilgan probirka (havo sovitkichi) bilan berkitib, qaynab turgan suv hammomiga 20 minut quyiladi. Sovitilgan gidrolizatdan 2 ml olib, uning ustiga 4 ml Dishe reaktivi qo‘shiladi. Aralashma qaynab turgan suv hammomida 10 minut qizdiriladi, so‘ngra sovitiladi. Aralashma barqaror ko‘k rangga bo‘yaladi. Rangning ravshanlik darajasi FEK da, qizil svetofil’tr (600 nm) yordamida aniqlanadi. Zarurat bo‘lsa, gidrolizat Dishe/suv (2:1 nisbatdagi) bilan suyultiriladi. To‘qimadagi DNK miqdori dezoksiriboza asosida tayyorlangan darajalash egri chizig‘idan foydalanib, hisoblab topiladi. Dezoksiriboza uchun darajalash egri chizig‘i quyidagicha chiziladi: avval 1 ml da 0,04; 0,08; 0,12; 0,16; 0,2 mg dezoksiriboza bor standart eritmalar seriyasi tayyorlanib, Dishe reaktivi bilan rangli reaksiya qilinadi. Aralashma rangining ravshanlik darajasi FEK da aniqlanib optik zichligi ordinata o‘qiga, dezoksiriboza miqdori absissa o‘qiga qo‘yib chiqiladi va grafik chiziladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. DNK ning nukleotid tarkibini aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: vakuum eksikator; ampula, laboratoriya sentrifugasi, sentrifuga probirkasi, «M» tipdagi Leningrad xromatografiya qog‘ozi, ultraxemiskop, spektrofotometr, xromatografiya kamerasi, 37 0 S li termostat, perxlorat kislotaning 56% li yoki 70% li eritmasi, KOH ning 4 M eritmasi, konsentrlangan HCl, HCl ning 0,1 n. eritmasi, DNK preparati, 36% li etil spirni erituvchi sistema: n-butanol-H 2 O-kons. ammiak - 60:10:0,1. Dezoksiribonuklein kislotaning nukleotid tarkibini aniqlash uchun avval toza DNK perxlorat kislota ta‘sirida gidrolizlanadi, so‘ngra gidrolizatdagi nukleotidlar kolonkali, qog‘oz xromatografiyasi yoki elektroforetik usullar yordamida ajratiladi va nukleotidlar miqdori spektrofotometrik usulda aniqlanadi. DNK nukleotid tarkibini qog‘oz xromatografiya usulida aniqlash 200-500 mg hayvon to‘qimasidan ajratib olingan DNK preparati 2 marta 36% li etil spirtda yuvilgach, vakuum eksikatorda quritiladi. Quritilgan DNK 1-2 tomchi 70% li (yoki 56% li) perxlorat kislota eritmasida namlanadi va kavsharlangan ampulada, qaynab turgan suv hammomida 1 soat (agar 56% li perxlorat kislota ishlatilsa, ikki soat) gidrolizlanadi. Bunday sharoitda DNK erkin asoslargacha gidrolizlanadi. Ampula ochilib, gidrolizat kapilyar yordamida sentrifuga probirkasiga o‘tkaziladi. Ampula devori juda oz miqdordagi distillangan suv bilan chayqaladi. Chayindi ham sentrifuga probirkasiga quyiladi. Gidrolizat quyilgan probirkaga avval 2 tomchi 4 M kaliy gidroksid, so‘ngra neytrallanguncha tomchilatib 1 M o‘yuvchi kaliy eritmasi qo‘shiladi. Shundan keyin kapillyar yordamida 1 tomchi konsentrlangan xlorid kislota tomizib, 10 minut 2000-3000 ayl/min tezlikda sentrifugat keyingi xromatografik analiz uchun ishlatiladi. DNK gidrolizatini qog‘oz xromatografiya usulida analiz qilish Gidrolizatni tarkibiy qismlarga ajratish uchun ishqoriy muhitli erituvchi sistema: n- butanol-suv-kons. ammiak (60:10:0,1 nisbatda) ishlatiladi. Pastga oquvchi xromatografiya uchun «Leningradskaya medlennaya» («M») tipidagi qog‘ozdan foydalaniladi. «Guvoh» modda sifatida 25-50 nonamol miqdorda nuklein kislota tarkibiga kiruvchi purin va pirimidin asoslar tomiziladi. Tekshirilayotgan gidrolizatlar xromatogrammaga 0,05-0,1 ml hajmda tomiziladi, bu bitta dog‘dagi «guvoh» modda sifatida tomizilgan asoslar miqdoriga to‘g‘ri keladi. Xromatografik ajralish protsessi 20-40 soat davom etadi. Azotli asoslarning qog‘ozdagi lokalizatsiyasi ultraxemiskopda aniqlanadi. Asoslar start chizig‘idan boshlab quyidagi tartibda joylashadi: guanin, sitozin, 5-metiltsitozin, adenin, timin. Gidrolizatdagi asoslarni miqdoriy jihatdan aniqlash uchun xromatogrammadagi ultraxemiskop yordamida chegaralangan zonalar qirqib olinib 5 ml 0,1 n. HCl eritmasida 37 0 S da, 12 soat davomida elyutsiya qilinadi. Kontrol sifatida qog‘ozning azot asoslari tarqalmagan qismi qirqib olinib, bir xil sharoitda elyutsiya qilinadi. Elyuatlarning optik zichligi spektrofotometrning 1 sm li kyuvetalarida kontrolga qarshi quyidagi jadvalda berilgan to‘lqin uzunliklarda aniqlaniladi: Asoslar To‘lqin uzunligi Hisoblash uchun koeffitsient Guanin 250-290 0,714 Adenin 250-290 0,399 Sitozin 270-290 0,940 5-metiltsitozin 280-300 0,893 Timin 260-290 0,743 Hisoblash uchun javdval asosida optik zichlik ayirmasi, masalan, adenin uchun D=D 260 - D 290 topilib, bu miqdorni hisoblash koeffitsientiga ko‘paytirilsa, 5 ml elyuatdagi asosning mikromol miqdori kelib chiqadi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. DNK mi q dor i ni kolorimetrik usul bilan aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: DNK ning suvli eritmasi, difenilamin reaktivi, distillangan suv, probirka va shtativlar, 1-2 ml li o‘lchov pipetkalari, FEK, 0,5 sm qalinlikdagi kyuvetalar. DNK tarkibidagi dezoksiriboza difenilamin bilan ko‘k rang hosil qiladi. Rangning intensivligi DNK miqdoriga to‘g‘ri proporsionalligidan, fotoelektrokolorimetrdan foydalanil ib, miqdoriy analiz o ‘ tkazish mumkin. Bitta tekshiruv va bitta nazorat probirkasi tayyorlanadi. Birinchisiga DNK ning suvli eritmasidan 1 ml, ikkinchisiga 1 ml distillangan suv solinadi. H ar ikkala probirkaga 2 ml dan difenila min reaktivi solib, 10 da q i q a suv hammomida ushlab turiladi. Bir ozdan so ‘ ng probirkalardagi suyuqliklar sovitiladi va FEK ning q izil nur fil’trida nazorat suyuqligi q arshi s ida k o‘ riladi. Tekshiriluvchi DNK ning optik zichligini topgach, o‘ lchov egri chizi g‘ idan uning mi q dori aniqlanadi. O‘ lchov egri chizig‘ini tayyorlash. 3 ta probirkaga konsentrasiyasi turlicha bo‘lgan (50, 100, 200 mkg/ml) DNK eritmasidan 1 ml va difenilamin reaktividan 2 ml solib, 10 daqiqa qaynab turgan suv hammomida qizdiriladi. Eritma sovitilgach yu q oridagidek FEK da optic zichligi aniqlanadi. Topilgan optik zichlik va DNK mi q doridan o‘ lchov egri chizi g‘ i tuziladi. Abssissa o‘q iga DNK mi q dori, ordinata o‘q iga optik zichliklar keltiriladi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 4. Kolorimetrik usul bilan RNK miqdorini aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: RNK ning suvli eritmasi, orsin reaktivi distillangan suv , probirkalar, shtativlar, pipetkalar, FEK, 0,5 sm qalinlikdagi kyuveta. RNK tarkibidagi pentoza orsin reaktivi bilan rangli birikma hosil qiladi. Rangning optik zichligi kalorimetrda o‘ lchanadi va o‘ lchov egri chizi g‘ idan RNK mi q dori topiladi. 1. Tekshiruv tajriba probirkasiga 1 ml RNK eritmasi va 2 ml orsin reaktivi solinadi. Naz o rat probirkasiga esa 1 ml distillangan suv va 2 ml orsin reaktivi solinadi. Ikkala probirka suv h ammomida 20 daqiqa tutib turiladi. B ir ozdan s o‘ ng‘ eritmalar sovitilib, FEK ning q izil nur fil’trida nazorat probirkasi q arshisida optik zichlik topiladi. RNK ning mi q dori o‘ lchov egri chizi g‘ idan aniqlanadi. 2. O‘ lchov egri chizi g‘ ini tayyorlash. 3 ta probirkaga 1 ml dan 50, 100, 200 mkg/ml RNK eritmasi va 2 ml dan orsin reaktivi solib, yu q oridagidek suv h ammomida qizdiriladi. 20 daqiqa o‘ tgach, eritmalar sovitilib, FEK da ularning optik zichligi aniqlanadi. Abssissa o‘q iga RNK ning mi q dori, ordinata o‘q iga optik zichlik keltirilib, o‘ lchov egri chizi g‘ i tuziladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… IV. MODUL. LIPIDLAR KIMYOSI ODDIY LIPIDLAR. ODDIY LIPIDLARNING OLINISHI VA FIZIK–KIMYOVIY XOSSALARI YOG‘LARNI AJRATIB OLISH VA XOSSALARINI TEKSHIRISH 1. Biologik suyuqliklardan yog‘ ajratib olish Kerakli asbob va reaktivlar: probirkalar, 10 ml li o‘lchov silindri, darajalangan probirka, 50 ml li bug‘latuvchi chinni kosacha, suv hammomi, Na 2 CO 3 ni 10% li eritmasi, dietil efir, sut. Biologik ob‘ektlar ichida sut yog‘ ajratib olish uchun eng qulay materialdir. Undan yog‘ ajratib olish ishqoriy muhitda organik erituvchi efir bilan ekstraksiya qilishga asoslangan. 25 ml li ajratkich voronkaga 10 ml sut, 5 ml efir, 3 ml 10% li natriy karbonat eritmasi quyib, 0,5-1 minut chayqatiladi va efirli qavat ajratib olinadi. Suv hammomi yordamida ohistalik bilan efir uchirib yuborilsa, kosachada sut moyi qoladi. 2. Yog‘larning sovunlanishi va yog‘ kislotalari olish Kerakli asbob va reaktivlar: 50 ml li qizdirishga chidamli kolba, qaytar sovutgich yoki probirkaga o ‘ rnatilgan 60-70 sm uzunlikdagi shisha nay, suv hammomi, fil’tr qog‘oz, kaliy gidroksidning spirtdagi 10% li eritmasi, konsentrlangan xlorid kislota, spirtdagi 0,1% li eritmasi, kalsiy xloridning 5% li eritmasi, 10% li qo‘rg‘oshin atsetat eritmasi, paxta moyi. Neytral yog‘lar ishqoriy sharoitda gidrolizlanganda glitserin va yog‘ kislotalar (yoki ularning natriyli va kaliyli tuzlari – sovun) hosil bo‘lsa, bunday reaksiya yog‘larning sovunlanishi deb ataladi: Agar yog‘lar kislota ta’sirida gidrolizlansa, sovun o‘rniga erkin yog‘ kislotalar hosil bo‘ladi. Yog‘ to‘la gidrolizga uchratilgandan keyin, gidrolizatga konsentrlangan xlorid kislota qo‘shilsa, erkin yog‘ kislotalar ajraladi. 50 ml kolbaga 1g mol yog‘i yoki paxta moyi olib, uning ustiga 10% li KOH ning spirtli eritmasidan 10 ml quyiladi. Kolba og‘zi qaytar sovitkich sifatida uzunligi 60-70 sm bo‘lgan shisha nay o‘rnatilgan probka bilan berkitiladi. Shundan keyin kolbadagi aralashma qaynayotgan suv hammomida 30-45 minut davomida qizdiriladi. Gidroliz tamom bo‘lganligiga ishonch hosil qilish uchun kolbadagi aralashmadan shisha tayoqcha yordamida 1 tomchi olib 2-3 tomchi suvda aralashtiriladi va fil’tr qog‘ozga tomizib quritiladi.Agar fil’tr qog‘ozda dog‘ qolsa, qizdirish davom ettiriladi, dog‘ qolmasligi esa gidroliz tamom bo‘lganini bildiradi. Gidroliz oxiriga yetgach, gidrolizatni chinni kosachaga olib, ustiga 10 ml suv quyiladi va suv hammomida spirt to‘la uchib ketguncha qizdiriladi. Shundan keyin gidrolizatdan 3-4 ml olib, unga 3-4 tomchi konsentrlangan xlorid kislota qo‘shilsa, ajralib chiqqan erkin yog‘ kislotalar cho‘kadi. Cho‘kma fil’trlanadi va distillangan suv bilan yuviladi, fil’trat esa tashlab yuboriladi. Cho‘kmani yuvish voronkadan o‘tayotgan suvning kislotaliligi lakmusga nisbatan neytral bo‘lguncha davom ettiriladi. Olingan toza yog‘ kislotalar cho‘kmasi 2 ml efirda eritiladi. Probirkaga 2 ml spirt quyib, uning ustiga 10% li soda eritmasidan 1 tomchi va fenolftalein eritmasidan 2 tomchi qo‘shiladi, suyuqlik pushti-qizil ranga bo‘yaladi. Shu qizil rangli suyuqlik ustiga yog‘ kislotalarining efirli eritmasi qo‘shiladi, natijada aralashmadagi soda bilan yog‘ kislotalar reaksiyaga kirishib, muhit neytrallanadi va eritma rangsizlanadi. Chinni kosachada qolgan gidrolizatdan 3 ta probirkaga 1 ml dan quyiladi. Birinchiga teng hajmda suv qo‘shib chayqatiladi. Hosil bo‘lgan sovun suvning sirt tarangligini pasaytiradi, natijada ko‘pik hosil bo‘ladi. Ikkinchi probirkadagi gidrolizat ustiga kalsiy xloridning 5 %li eritmasidan bir necha tomchi tomiziladi, bunda yog‘ kislotalarining kalsiyli tuzi hosil bo‘ladi, bu tuz suvda erimasligi sababli cho‘kmaga tushadi. 2R- COONa +CaCl 2 = (RCOO) 2 Ca + 2NaCl Uchinchi probirkaga qo‘rg‘oshin atsetatning 10% li eritmasidan 3-4 tomchi qo‘shiladi, bunda yog‘ kislotalarning suvda erimaydigan qo‘rg‘oshinli tuzi hosil bo‘ladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. Yog‘larning eruvchanligini aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: probirkalar, shtativ, spirt lampa yoki gaz gorelkasi, fil’tr qog‘oz, etil spirt, atseton, efir, petroley efiri, dixloretan, xloroform, benzol, benzin, uglerod (IV)-sulfid, kaliy gidrosulfat kristallari, kumush gidroksidining ammiakli eritmasi bilan namlangan fil’tr qog‘oz, fuksin-sulfat kislota eritmasi bilan namlangan fil’tr qog‘oz, paxta, kungaboqar moyi, margarin, qo‘y va mol yog‘i. 20 ta probirka olib, ularni 2 gruppaga bo‘linadi, nomerlanadi. Har ikkala gruppadagi probirkalarga navbati bilan 2 ml dan suv, spirt, atseton, efir, petroliy efiri, dixloretan, xloroform, benzol, benzin va uglerod sulfid quyiladi. Birinchi gruppadagi probirkalarning hammasiga bir necha tomchi paxta yoki boshqa o‘simlik moyi, ikkinchi gruppadagi probirkalarga no‘xat kattaligida mol yoki qo‘y yog‘i solib, normal temperaturada eruvchanligi kuzatiladi, so‘ng suv hammomida qizdirib ko‘riladi. Kuzatish natijalari yozib qo‘yiladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 4. Yog‘larni emulsiya holatiga o‘tkazish Kerakli asbob va reaktivlar: probirkalar, 1ml li pipetka, letsitin, oqsilning 10% li eritmasi, natriy karbonatning 10% li eritmasi, sovunning 1% li eritmasi, paxta moyi. Yog‘larni sirt aktiv moddalar - ishqor, ishqoriy reaksiya beruvchi tuzlar - sovun, soda, fosfat tuzlari, oqsil, fosfatidlar, o‘t kislota tuzlar emulsiyaga aylantiradi. Bu moddalar mayda- mayda yog‘ parchalarining atrofini yupqa parda ko‘rinishida o‘rab, shu orqali ularni qaytadan birikishiga yo‘l qo‘ymaydi. 6 ta probirka olib, ularning birinchisiga 1 ml distillangan suv, ikkinchisiga ozgina letsitin, uchinchisiga 1 ml o‘t suyuqligi, to‘rtinchisiga 1 ml natriy karbonat, beshinchisiga 1 ml sovun, oltinchisiga shuncha miqdorda oqsil eritmasidan quyib, probirkalarning hammasiga 2-3 tomchidan paxta moyi tomizilgach, ulardagi aralashmani yaxshilab chayqatiladi. So‘ng probirkalarda emultsiya hosil bo‘lishi kuzatiladi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 5 . Yog‘lardagi glitsirenga xos reaksiya Kerakli asbob va reaktivlar. Probirkalar, shtativ, spirt lampa yoki gaz gorelkasi, fil’tr qog‘oz, etil spirt, atseton, efir, petroley efiri, dixloretan, xloroform, benzol, benzin, uglerod (IV)-sulfid, kaliy gidrosulfat kristallari, kumush gidroksidining ammiakli eritmasi bilan namlangan fil’tr qog‘oz, fuksin-sulfat kislota eritmasi bilan namlangan fil’tr qog‘oz, paxta, kungaboqar moyi, margarin, qo‘y va mol yog‘i. Tabiiy yog‘lar tarkibida ma’lum miqdorda erkin glitserin bo‘ladi, uni aniqlash uchun ma’lum miqdorda yog‘ yoki moy olib, suv tortib oluvchi modda – kaliy bisulfat ishtirokida qizdirilsa, o‘tkir hidli akril aldegid – akrolein ajraladi: Akrolein ajralganini aldegidga xos reaksiyalar yordamida aniqlash mumkin. Lipidlar tarkibida erkin glitserin bo‘lmaydi, shu sababli ular akrolein reaksiyasini bermaydi. Probirkaga 0,5-1 ml paxta moyi quyiladi, ustiga 2-3 g kaliy bisulfat kristallaridan qo‘shib mo‘rili shkafda qizdiriladi. O‘tkir hidli oq akrolein bug‘lari ajraladi. Bug‘larga kumush oksidning ammiakli eritmasi bilan namlangan fil’tr qog‘oz tutilsa, u qora ranga kiradi, fuksinsulfat kislota eritmasi bilan namlangan fil’tr qog‘oz tutilsa, pushti dog‘ paydo bo‘lishi kuzatiladi. Bu har ikkala reaksiya aldegidlarga xos reaksiya bo‘lib, akrolein ajralayotganini bildiradi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… YOG‘LARNING ASOSIY SIFAT KO‘RSATKICHLARINI ANIQLASH 1. Yog‘larning to‘yinganlik darajasini aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar. 25 yoki 50 ml li stakan yoki kolba, mikrobyuretka, 250 ml shlifli kolba, analitik tarozi, penitsillin idishi, 100 ml li o‘lchov silindri, byuretka (25 ml li ) 1 ml li pipetka, xloroform, yodning 0,001 n. eritmasi, yodning 0,2 n. spirtli eritmasi, tiosulfatning 0,1 n. eritmasi, qo‘y yog‘i, mol yog‘i, margarin, paxta yoki boshqa o‘simlik moyi. Tabiiy yog‘lar tarkibida to‘yinmagan yog‘ kislotalar bo‘lishi bilan bir - biridan farq qiladi . To‘yinmagan birikmalar o‘z molekulasidagi qo‘shbog‘ hisobiga galogenlarni biriktirib olish reaksiyasiga oson kirishadi . Odatda, yog‘larning to‘yinmaganlik darajasi yod soni bilan belgilanadi. 100 g yog‘ biriktirib olgan yod miqdori yod soni deb yuritiladi. Yog‘larning yod soni ularning eng muhim kimyoviy xarakteristikasi bo‘lib, u yog‘larning turli o‘zgarishlariga moyilligini aniqlashga yordam beradi. Turli yog‘larning to‘yinmaganlik darajasini taqqoslash Turli xil yog‘lar (mol, qo‘y yog‘i, margarin, paxta moyi yoki boshqa o‘simlik moylari) dan 0,5 g dan tortib olinadi va ularning har biri 3 ml xloroformda eritiladi va mikrobyuretkada yodning 0,001 n. eritmasi bilan tirtlanadi. Yod eritmasi asosida qancha sarflanganiga qarab olingan yog‘larning to‘yinmaganlik darajasi taqqoslanadi. Yod sonini aniqlash Ikkita 50 ml li quruq kolba olib , birinchisiga 0,12-0,2 g tekshiriladigan yog‘ solinadi . Ikkinchisiga 0,1-0,2 ml suv quyiladi. Yog‘ni eritish uchun har ikkala kolbaga 10 ml dan yodning spirtdagi 0,1 n. eritmasidan quyib, ustiga 10,1 ml dan distillangan suv qo‘shiladi va kolba probkasi berkitib, yaxshilab chayqatiladi. 5 minut o‘tgach, kolbadagi suyuqlik 0,1 n. tiosulfat eritmasi bilan och sariq rangga kirguncha, so‘ngra 1 ml kraxmal eritmasidan qo‘shib, ko‘k rang yo‘qolguncha tirtlanadi. Kontrol va tajriba uchun sarflangan 0,1 n. tiosulfat eritmalari hajmlarining farqi olingan moyning yod soniga to‘g‘ri keladi. Yod soni quyidagi formula bo‘yicha hisoblab topiladi. Yod soni= (V 1− V 2)∗0,0127 ∗100 a Bu yerda V 1 - kontrol titrlash uchun sarflangan 0,1 n. tiosulfat eritma-sining ml miqdori; V 2 - tajriba uchun ketgan 0,1 n. tiosufatning ml miqdori; 0,127 - tiosulfatning yod bo‘yicha titr; α - olingan yog‘ning miqdori (g).  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. Yog‘larning kislota sonini aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: analitik tarozi, penitsillin idishi, 100 ml li Erlenmeyer kolbasi, mikrobyuretka, neytrallangan 1:1 nisbatli spirt-efir aralashmasi, fenolftaleinning spirtdagi 0,1 %li eritmasi, kaliy gidroksidning spirtdagi 0,1 n. eritmasi. Boshqa fizik-kimyoviy ko‘rsatgichlar qatori yog‘larning kislota sonini aniqlash ham katta ahamiyatga ega. Agar yog‘ yaxshi pishib yetilgan urug‘lardan olingan bo‘lsa, erkin yog‘ kislotalar oz, pishmagan urug‘lardan olingan bo‘lsa, kislotalar miqdori ko‘p bo‘ladi. Yog‘ uzoq saqlangan bo‘lsa, triglitseridlar qisman gidrolizlanib, erkin yog‘ kislotalar to‘planishiga olib keladi. Yog‘lardagi erkin kislotalar miqdorini ifodalovchi ko‘rsatgich kislota soni deb ataladi. 1 g yog‘dagi erkin yog‘ kislotalarini neytrallash uchun sarf bo‘lgan kaliy gidroksidning miqdori yog‘larning kislota sonini belgilaydi. Yog‘ning kislota soni qancha yuqori bo‘lsa, sifati shuncha past bo‘ladi. Yog‘larning kislota sonini aniqlash, yog‘lardagi erkin yog‘ kislotalarini 0,1 n. kaliy gidroksid bilan titrlashga asoslangan. Titrlash uchun albatta kaliy gidroksiddan foydalanish kerak, chunki hosil bo‘ladigan kaliyli sovun tajriba sharoitida suvda yaxshi eriydi. Yod sonini aniqlashdagi singari, 1 g yog‘ni aniq tortib olib, 50 ml li sig‘imli Erlenmeyer kolbasiga solinadi va 10 ml neytral spirt–efir aralashmasida (1:1) eritiladi. Yog‘ erigandan keyin 2 tomchi fenolftalein eritmasidan tomizilib, aralashma och pushti ranga kirguncha o‘yuvchi kaliyning spirtdagi 0,1 n. eritmasi bilan titrlanadi. Chayqatilganda 0,5-1 minut davomida yuqolmaydigan rang hosil bo‘lguncha titrlash davom ettiriladi. Yog‘ning kislota soni quyidagi formula bo‘yicha hisoblab topiladi: K=V*T bu yerda: K – kislota soni; V – sarflangan 0,1 n. o‘yuvchi kaliyning ml miqdori; T – 0,1 n. KOH ning titri.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………  3. Yog‘larning sovunlanish sonini aniqlash Kerakli asbob va reaktivlar: 50 ml li kolba, analitik tarozi, 1 ml li pipetka, 50 ml li o‘lchov silindri, qaytar sovutgich yoki uzunligi 60-70 sm li shisha nay, suv hammomi, mikro byuretka, kaliy gidroksidning spirtdagi 0,5 n. eritmasi, fenolftaleinning spirtdagi 0,1 % li eritmasi, xlorid kislotaning 0,1 n. eritmasi, paxta moyi, mol va qo‘y yog‘i. 1 g yog‘dagi erkin va bog‘langan yog‘ kislotalarini neytrallash uchun sarflangan o‘yuvchi kaliyning ml miqdori sovunlanish soni deb ataladi. Sovunlanish soni bilan kislota soni o‘rtasidagi farq efir soni hisoblanadi. 50 ml sig‘imli ikkita kolba olib, biriga analitik tarozida tortilgan 0,5 g yog‘ solinadi va ikkinchisiga 0,5 ml distillangan suv quyiladi. Har ikkala kolbaga byuretkadan 15 ml dan 0,5 n. kaliy gidroksidning spirtli eritmasidan quyiladi. Kolbalar og‘zini qaytar sovutgich (uzunligi 70 sm li shisha nay) o‘rnatilgan tiqin bilan berkitib, qaynayotgan suv hammomiga qo‘yiladi, vaqti- vaqti bilan chayqatib turiladi. Kolbadagi suyuqlik sekin qaynab turishi va shisha nayning uchki qismi qizib ketmasligi zarur. Sovunlanish oxiriga yetgach, kolbalarga 15-20 ml dan suv quyiladi va 3-4 tomchi fenolftalein tomizib, 0,5 n. xlorid kislota bilan pushti rang yo‘qolguncha titrlanadi. Sovunlanish soni quyidagi formula bo‘yicha hisoblab topiladi: Sovunlanish soni = (V1−V2)∗28 a bu yerda: V 1 – control kolbadagi suyuqlikni titrlash uchun sarflangan 0,5 n. KOH miqdori (ml); V 2 – tajriba uchun ketgan 0,5 n. KOH miqdori (ml); 28-0,5 n. KOH ning titri; α – aniqlash uchun olingan yog‘ning miqdori.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… MUSTAQIL TA’LIM I-BLOK MINI- KEYSLAR I.MODUL AMINOKISLOTALAR, PEPTIDLAR, OQSILLAR KEYS № 1 Sut emizuvchi hayvonlar, shuningdek, odamning miya to‘qimalaridan 1975 yilda ajratib olingan, narkotik ta’sirga ega pentapeptidning birlamchi tuzilishini aniqlash uchun tadqiqotchi tomonidan quyidagi amallar bajarildi: a) N-uchki aminokislotani aniqlash uchun Senjer usulida DNF-hosila olindi va identifikasiya qilinganda tirozin aminokislotasi ekanligi aniqlandi; b) tripsin fermenti ta’sir ettirilganda, molekulada o‘zgarish bo‘lmadi; v) ximotripsin fermenti bilan gidroliz qilindi va mahsulotlar yupqa qatlamli xromatografiya usulida identifikatsiya qilinganda erkin holdagi tirozin, metionin aminokislotalari va bittadan tripeptid va tetrapeptid olindi; g) tripeptid kislotali gidroliz qilindi va xromatografik analiz qilinganda tarkibida fenilalanin va 2 ta gli t sin borligi aniqlandi; d) tetrapeptid kislotali gidrolizdan so‘ng tahlil qilinganda esa tarkibida tirozin, fenilalanin va 2 ta gli t sin borligi ma’lum bo‘ldi; Olingan natijalardan tadqiqotchi pentapeptidning birlamchi tuzilishini 4 xil variantini taklif etdi: 1) Tir-Met-Fen-Gli-Gli; 2) Tir-Fen-Gli-Gli - Met; 3) Met-Gli-Fen-Gli - Tir; 4) Tir-Gli-Gli-Fen-Met. Keys-karta. Taklif etilgan birlamchi strukturalardan qaysi biri haqiqiy tuzilishni ifodalaydi? Qanday dalillar buni isbotlaydi? Ushbu pentapeptidning tuzilishini aniqlashda Siz qaysi usulni taklif etasiz? Keltirilgan amallarning mohiyatini ifodalovchi reaksiya tenglamalarini yozing. Ushbu peptid enkefalinlar deyiladi, ularning ahamiyatini va organizmda bajaradigan funksiyasini ayting. Himoyalash va faollash usullaridan foydalanib, ushbu peptidni kimyoviy sintez qilish reaksiya tenglamalarini yozing.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………….. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ……………………… II.MODUL UGLEVODLAR. MONO-, DI- VA POLISAXARIDLAR KEYS № 2 1. Mevalar tarkibida uchraydigan D-qatorga mansub monosaxaridning tuzilishini aniqlash uchun nemis olimi E. Fisher uni avval bromli suv bilan oksidladi. Hosil bo‘lgan mahsulotga Fe (II) tuzlari ishtirokida H 2 O 2 ta’sir ettirildi. Olingan mahsulot kislotali sharoitda dekarboksillandi. Mahsulot kumush oksidning ammiakli eritmasi bilan reaksiyaga kirishishi ma’lum va konsentrlangan nitrat kislota eritmasi bilan oksidlanganda, optik nofaol eritro-vino kislotasi hosil bo‘ldi. Monosaxarid konsentrlangan nitrat kislota bilan oksidlanganda hosil bo‘lgan mahsulot optik faol bo‘lib, qutblangan nur tekisligini buradi. Dastlabki monosaxaridga sianid kislota ta’sir ettirildi va hosil bo‘lgan mahsulot palladiy katalizatorligida ammiakning suvli eritmasida vodorod bilan qaytarildi. Natijada aldogeksozalardan biri hosil bo‘ldi. Keys-karta. Keltirilgan ma’lumotlar asosida E.Fisher monosaxaridning strukturasini qanday taxmin qildi? Monosaxarid qaysi oilaga: pentoza yoki geksozaga kiradi? Sizningcha monosaxarid qanday tuzilgan? Javobingizni izohlang. Uning trivial nomini ayting. Biologik ahamiyati nimadan iborat? Barcha jarayonlarning reaksiya tenglamalarini yozing.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………….. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………….. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… 2. Noma’lum disaxaridning tuzilishini aniqlash maqsadida aspirant avval uni ishqoriy muhitda dimetilsulfoksid (DMSO) bilan metilladi. Reaksiyaning miqdoriyligini aniqlash maqsadida mahsulotni suvsiz muhitda IQ spektrini oldi (A) va yana DMSO bilan metillash o‘tkazib, mahsulotning IQ spektri qaytadan olindi (B). A) B) Metillash mahsuloti kislotali muhitda metanoliz qilindi. Reaksiya mahsuloti gaz-suyuqlik xromatografiyasi yordamida o‘rganilganda uning tarkibi quyidagicha ekanligi aniqlandi: 2,3,5- trimetil-α-D-glyukopiranoza; 2,3,4,5-tetrametil-α-D-glyukopiranoza; 2,3,5-trimetil-β-D- glyukopiranoza. Dastlabki disaxaridga E-coli dan ajratib olingan α va β glikozidaza fermentlari alohida-alohida ta’sir ettirildi. Bunda birinchi ferment ta’sirida disaxarid parchalangani kuzatildi. YaMR spektroskopiyasi usulida tadqiq qilinganda N 1 va N 2 larning spin-spin o‘zaro ta’sir doimiysi 8,1 Gs ekanligi kuzatildi. Barcha olingan ma’lumotlarni tahlil qilib, aspirant dastlabki disaxarid ikkita moddaning aralashmasi bo‘lsa kerak, deb taxmin qildi. Chunki reaksion aralashmada α va β glyukopiranozaning hosilalari mavjud edi. Ikkita disaxariddan biri maltoza, biri sellobioza deb o‘yladi. Keys-karta. Tadqiqotchining taxmini to‘g‘rimi? Tadqiqotchi disaxaridning tuzilishini aniqlashda xatolikka yo‘l qo‘yganmi? Dastlabki disaxarid bitta moddami yoki ikkita modda aralashmasimi? Qanday dallillar buni isbotlaydi? Sizningcha bu qaysi disaxarid? Keltirilgan ma’lumotlardan qaysi biri ortiqcha yoki qanday ma’lumot yetishmaydi? IQ spektrlari tahlili (A va B) nimani ko‘rsatadi? Barcha jarayonlarni ifodalovchi reaksiya tenglamalarini yozing va usullar mohiyatini izohlang. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………….. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………… III.MODUL NUKLEIN KISLOTALAR KEYS № 3 Achitqi bakteriyasidan ajratib olingan nuklein kislotaning bir fragmentining birlamchi tuzilishini aniqlash uchun kimyo bo‘limining magistranti quyidagi ishlarni amalga oshirdi: A) avval polinukleotidkinaza fermenti ishtirokida 32 P-ATP bilan ishlandi; B) so‘ngra aralashma 4 ta idishda teng taqsimlandi va idishlarga mos ravishda quyidagi reaktivlar bilan ishlov berildi: 1 – dimetilsulfat+pipiridin; 2 – chumoli kislota+pipiridin; 3 – gidrazin+osh tuzining suyultirilgan eritmasi+pipiridin; 4 – gidrazin+osh tuzining to‘yingan eritmasi; S) olingan aralashmalar vertikal gel-elektroforez usulida bir vaqtning o‘zida to‘rtta kolonkada elektroforez qilindi; D) elektroforegramma “ochilganda” uning ko‘rinishi quyidagicha bo‘ldi: E) Olingan ma’lumotlar asosida magistrant nuklein kislotaning fragmenti uchun quyidagi bir necha nukleotidlar ketma-ketligining variantlarini taklif etdi: 1) *- 5 ’ - G- A -T-G-A-T-G-G-C-T-A-G-C-T-3’ 2) *- 5 ’ - G- A -T-G-A-C-G-G-T-T-A-G-C-T-3’ 3) *- 5 ’ - G- G -T-C-A-T-G-A-C-T-G-T-C-T-3’ G G+A T+C C G G+A T+C C Keys-karta. Taklif etilgan variantlarning qaysi biri to‘g‘ri? Tadqiqotchi qayerda xatolikka yo‘l qo‘ygan? Olib borilgan tajribalar mohiyatini izohlang. Ushbu usulni qaysi olim (lar) taklif etgan? Barcha jarayonlarni izohlovchi reaksiyalar tenglamalarini yozing. Sizningcha nukleotidlar ketma-ketligini aniqlashda qaysi usuldan foydalangan ma’qul?  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………… II-BLOK VAZIYATLI MASALA VA MASHQ LAR 1 . Berilgan geptapeptid uchun quyida berilgan topshiriqlarni bajaring: Pro-Lys-Ser-Met-Ala-Tir-Asp Geptapeptidning pH=7,0 da zaryad yig‘indisini aniqlang. Ushbu peptidning umumiy zaryadlar yig‘indisi pH>7 da va pH<7 da qanday o‘zgaradi? Peptidning izoelektrik nuqtasini belgilang (pI >, < yoki =7,0). pH=7,0 bo‘lganda elektr maydonda bu peptid qaysi yo‘nalishda harakat qiladi (anodga yoki katodga)? 2. Quyidagi berilgan ma’lumotlardan foydalanib, tripeptiddagi aminokislotalar ketma-ketligini aniqlang. Aminokislotalarning N-uchi bo‘yicha analiz qilinganda, peptidning aminokislota tarkibi Asp-(Pro, Tir, Met) ekanligi ma’lum bo‘ldi. Sian bromid bilan gidrolizidan keyin (Met karboksil guruhi bilan ishtirok etgan peptid bog‘larni uzadi), tripeptid tarkibida Tir, Met, Asp aminokislotalari borligi aniqlandi. 3**. Kalamushlarga beriladigan ovqat oqsili tarkibidagi peptidlar fragmenti tarkibi quyidagicha: -Ala-Ser-Gli-Phen-His-Lys-Val- Ala, Phen, His aminoguruhlari 15 N izotopidan tashkil topgan, bu aminokislotalarning uglerod skeleti esa 14 C izotopidan iborat. 40 minutdan keyin jigar tekshirilganda: Aspartat va glutamatda 15 N izotopi borligi aniqlandi; Pirouzum va urokanin kislotalari 14 C bilan nishonlanganligi ma’lum bo‘ldi. Aminokislotalardan bu birikamlarning hosil bo‘lish reaksiyalarini yozing. Fermentlarni va kofermentlarni ko‘rsating. 4 . Keltirilgan peptiddagi qanday turdagi bog‘lar oshqozon-ichak fermentlarining qaysi biri ta’sirida uzilishini ko‘rsating: val–asp–fen–ile–liz–fen–arg–ser–sis–glu. 5. Oqsillarning uchlamchi strukturasini shakllanishida Tre va Glu qoldiqlari orasida qanday turdagi ta’sir yuzaga keladi. Javobingizni izohlang. 6 . Quyidagi peptidning formulasini yozing va qanday rangli sifat reaksiyalari yordamida aniqlash mumkinligini ko‘rsating. Glu–Tir–Pro–Gis. 7. Oshqozon-ichak traktiga tushgan peptidining tarkibi quyidagicha: Quyida keltirilgan fermentlar qaysi bog‘larni uzadi? Pepsin Tripsin Ximotripsin Karboksipeptidaza Aminopeptidaza 8. Qoramol qon zardobining albumini molekular massasi 204 ga teng bo‘lgan 0,58 % (o‘g‘irlik bo‘yicha) triptofandan ibotat. Qoramol albumin zardobining minimal molekulyar massasini hisoblang. Qoramolning albumin zardobining molekulyar massasi gel’-filtratsiya usuli bo‘yicha hisoblanganda 70 000 ni tashkil etdi. Albumin zardobi molekulasidagi triptofan qoldig‘i nechta? 9. Preparat tarkibidagi 2,0 mg arginaza 10 min davomida t=38°C va рН 9,0 sharoitda 30 mkmol mochevina namunasini katalizladi. Arginazaning solishtirma aktivligini hisoblang. 10. 37 0 C va pH 7,0 da suksinatdegirogenazaning 1 mg miqdori 5 min davomida yantar kislotasining oksidlanishini katalizlab, 10 mkmol fumar kislotasini hosil qildi. Optimal sharoitda fermentning solishtirma aktivligini hisoblang. 11 . 6-dezoksi-L-galaktoza (fukoza) ning epimerlanish reaksiyasi sxemasini keltiring. Bunda olingan monosaxaridlarning perspektiv formulalarini yozing. 12. D-glyukozaning qaytaruvchilik xususiyati farq qiluvchi ikki xil pentaasetatining sintezi sxemasini keltiring [Shabarov, Oreskaya]. 1 3 . Quyida keltirilgan monosaxaridlarning qaysilarini borat kislota bilan reaksiyasidan anomerlarini ( α - va β -shakllar) farqlash mumkin: D-galaktopiranoza, D-idopiranoza, D-fruktofuranoza, L-sorbofuranoza? 1 4 . Ma’lumki, L-idofuranozaning normal tuzilishli spirtlardan n-geptildan boshlab hosil qilgan glikozidlari termotrop suyuq kristallar hisoblanadi. Ushbu birikmalarning tuzilish formulalarini yozing. 15 . Quyidagi disaxaridlarning perspektiv formulalarini yozing: a) β -D-galaktopiranozil[1→5]-D-arabinoza; b) β -D-mannopiranozil [1→4]-D-mannoza; v) β -D-glyukopiranozil[1→3]-D-arabinoza; g) α -L-arabinofuranozil[1→6]-D-glyukoza; d) β -D-mannopiranozil- α -D-fruktofuranozid; e) β -D-glyukopiranozil- α -L-sorbofuranozid; j) β -D-glyukopiranozil[1→6]-L-sorboza. 16 . Quyidagi moddalarning mo‘l miqdordagi fenilgidrazin, bromli suv va natriy bordeyterid bilan ta’siri reaksiyalarining sxemasini keltiring: a) maltoza ( α -D-glyukopiranozil[1→4]-D-glyukopiranoza); b) laktoza ( β -D-galaktopiranozil[1→4]-D-glyukopiranoza); c) β -D-glyukopiranozil[1→3]-D-arabinofuranoza. 17 . 0,8 va 1,0 spesifiklik koeffisiyentiga ega ikki DNK molekulasining qaysi birining suyuqlanish temperaturasi yuqori bo‘ladi? Nima uchun? 18 . DNK aza – ferment, DNK molekulasidagi nukleotid bog‘larni parchalaydi, virus (adenovirus, gerpes virusi) DNK sining ko‘payishini to‘xtatadi. Hujayrada bu ferment va viruslar makromolekula singari bo‘lib, pinositoz pufagida izolirlangan holda bo‘ladi va pinositoz yo‘li orqali hujayraga tushadi. Nima uchun bu ferment hatto juda ko‘p miqdorda bo‘lsa ham hujayraning DNK molekulasiga ziyon yetkazmaydi?  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………….. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ……………………………………………………… III-BLOK TOPSHIRIQLAR A MINOKISLOTALAR , PEPTID LAR VA OQSIL LAR 1-jadval Aminokislotalarning xossalari № Nomi Qisqa nomlanishi 1 harfli belgisi Formulasi Fizik- kimyoviy tavsifi Biokimyoviy tasnifi (alm./alm- digan) 1 Glisin Gly G 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 2- jadval α-Aminokislotalar uchun muhim kimyoviy reaksiyalar № Reaksiya nomi Reaksiya Borish sharoiti, ahamiyati Aminoguruh reaksiyalari 1 Asillash 2 Shiff asoslarining hosil bo‘lishi 3 Serensen usulida titrlash 4 Van-Slayk usuli 5 F. Senjer reaksiyasi – DNF- hosilalarning olinishi 6 Edman reaksiyasi – FTG- hosilalarning olinishi 7 Dezaminlash, turlari Karboksil guruh reaksiyalari 8 Eterifikasiya 9 Galogenangidridlar hosil bo‘lishi 10 Aralash angidridlar hosil bo‘lishi 11 Dekarboksillash O‘ziga xos xossalari 12 Tioguruhni oksidlash 13 α-, β- va γ- aminokislotalarning qizdirishga munosabati 14 Og‘ir metallar kationlari bilan xelat birikmalar hosil qilishi 15 Peptid bog‘larining hosil bo‘lishi 3 - jadval Aminokislotalar rangli sifat reaksiyalar № Reaksiya nomi Reaksiya Borish sharoiti, ahamiyati, tashqi effekt 1 Biuret reaksiyasi 2 Ningidrin reaksiyasi 3 Ksantoprotein reaksiyasi 4 Fol reaksiyasi 5 Milon reaksiyasi 6 Metioninga nitroprussid reaksiyasi 7 Argininga Sakagu ch i reaksiyasi 8 Triptofanga Adamkevich reaksiyasi 9 Gistidinga Pauli reaksiyasi UGLEVODLAR 1-jadval Monosaxaridlarning tuzilishi va xossalari № Uglevodning nomi Belgisi Tuzilish formulasi Fizik-kimyoviy xossalari Tabiatda uchrashi, ahamiyati Aldotetroza 1 D , L -eritroza 2 D , L -treoza Aldopentozalar 1 D , L -riboza 2 D , L -ksiloza 3 D , L -arabinoza 4 D , L -liksoza Aldogeksozalar 1 D , L -alloza 2 D , L -altroza 3 D , L -glyukoza 4 D , L -mannoza 5 D , L -guloza 6 D , L -idoza 7 D , L -galaktoza 8 D , L -taloza Ketoterozalar 1 D , L -eritruloza Ketopentozalar 1 D , L -ribuloza 2 D , L -ksiluloza Ketogeksozalar 1 D , L -psikoza 2 D , L -fruktoza 3 D , L -sorboza 4 D , L -tagatoza Dezoksi- va aminosaxaridlar 1 2-dezoksi- D -riboza 2 L -fukoza 3 N -asetil- D - glyukozamin 4 N -asetil- D - galaktozamin 5 2,3-didezoksi- D - riboza Monosaxaridlarning boshqa hosilalari 1 D -glyukuron kislota 2 L -iduron kislota 3 D -glyukar kislota 4 Sorbit 5 Mannit 2-jadval Oligosaxaridlarning tuzilishi va xossalari № Oligosaxaridning Tuzilish formulasi, xalqaro nomi Tabiatda uchrashi, trivial nomi funksiyasi, ahamiyati Qaytarilmaydigan 1 Saxaroza 2 Tregaloza 3 Laktuloza Qaytariladigan 1 Maltoza 2 Laktoza 3 Sellobioza 4 Gensiobioza 3-jadval Polisaxaridlarning tuzilishi va xossalari № Polisaxaridning trivial nomi Tuzilish formulasi, xalqaro nomi Tabiatda uchrashi, funksiyasi, ahamiyati Gomopolisaxaridlar 1 Kraxmal 2 Glikogen 3 Sellyuloza 4 Xitin 5 Inulin 6 Pektinlar 7 Dekstranlar Geteropolisaxaridlar 1 Xondroitin-sulfatlar 2 Gialuron kislota 3 Geparin 4 Muramin 5 Agar-agar 6 Karagenan NUKLEIN KISLOTALAR 1-jadval Nukleotidlar tuzilishi № Nukleotid Struktura 1 ATP 2 GTP 3 TTP 4 CTP 5 UTP 6 dAMP 7 dGDP 8 dTTP 9 dCMP 10 dATP 2-jadval DNK va RNK ning turlari va funksiyalari № NK Tavsif Bajaradigan funksiyasi 1 yaDNK 2 mtDNK 3 kyaDNK 4 mRNK 5 rRNK 6 tRNK LIPIDLAR 1-jadval Yog‘ kislotalarining tuzilishi, tarkibi va xossalari № Nomi Tuzilish formulasi S atomlari soni Qo‘sh bog‘lar soni va o‘rni To‘yingan 1 Moy 2 Kapron 3 Kapril 4 Kaprin 5 Laurin 6 Miristin 7 Palmitin 8 Stearin 9 Araxin 10 Begen 11 Legnotserin Monoyen 1 Palmitoolien 2 Olien Poliyen 1 Linol 2 Linolen 3 Araxidon 2-jadval Ba’zi lipidlarning tuzilishi, tarkibi va xossalari № Nomi Tuzilish formulasi Fizik- kimyoviy xossalari Biologik roli A t silgliserollar 1 Palmitoil-linolenoil- oleoilgliserol 2 1-Oleoil-2- Palmitoil-3- stearoilglitserin Gliserofosfolipidlar Fosfatidilxolin Fosfatidilserin Fosfatidiletanolamin Sfingolipidlar Sfingozin Seramid Steroidlar Siklopentanpergidro -fenantren Xolesterin Palmitoil-xolesterol O‘t kislotalari Xolat kislota Xenodezoksixolat k- ta TAVSIYA ETILADIGAN ADABIYOTLAR Nazariy qism uchun 1. Ю.А.Овчинников. Биоорганическая химия. М. Просвещение. 1987. 2. Тюкавкина Н.А. Биоорганическая химия. Медицина. 1985. 3. А.Ленинджер. «Биохимия». М. Мир. Т.1-3. 1985. 4. Д.Мецлер. Биохимия. М. Мир. 1980. 5. А.Уайт, Ф.Хендлер и др. Основы биохимии. М. Мир. 1981. 6. Л.Страйер. Биохимия. М. Мир. Т.1-3. 1985. 7. Ч.Кантор, П.Шиммей. Биоорганическая химия. М. Мир. Т.1-3. 1985 8. Э.Гросс, И.Майендофер. Пептиды. М.Мир. 1983 9. В.В.Племенков. Введение в химию природн ых соединений. Казань.2001. 10. М.Диксон, Э.Уэбб. Ферменты. М., Мир. Т.1-3. 1982. 11. З.А.Шабарова, А.А.Богданов. Химия нуклеиновых кислот и их компонентов. М.Мир. Химия. 1978. 12. Н.К.Кочетков, А.Ф.Бочков и др. Химия углеводов. М . « Химия ». 1967. 13. E. Oripov, A. Nasrullayev. Bioorganik kimyo. O‘quv qo‘llanma. Toshkent. 2012. 270 b. Laboratoriya mashg‘ulotlari uchun 1. Ю . Б . Филлипович и др . Практикум по общей биохимии. М., 1975, 239 с. 2 . Асланов Х.А., Ауелбеков С.А., Юнусов Т.К. Методическое указание по курсу «Основы биоорганической химии. Часть 1. 1989 3. Асланов Х.А., Касимов Ш.К., Бегишева А.И., Ауелбеков С.А. Методическое указание по курсу «Основы биоорганической химии. Часть 2. 1989 4. Асланов Х.А., Кушмурадов Ю.К., Зияев А.А. Юнусов Т.К. Ауелбеков С.А. Методическое пособие «Практикум по биоорганической химии». 1991. 5. Ауелбеков С.А., Кушмурадов Ю.К., Зияев А.А., Юнусов Т.К. Тен Л.Н. Бадалбаева Т.А. «Биоорганик кимёдан амалий машғулотлар. 1995. 6 . Oripov E.O. Bioorganik kimyodan lab o ratoriya ishlari va seminar darslari, testlar. Uslubiy qo‘llanma. SamDU 2004. 7. Ю.Б.Филлипович и др. Практикум по общей биохимии. М., 1975, 239 с. 8 . Шапиро Д.К. Практикум по биологической химии. Минск. 1976. 9 . Северин С.Е. Практикум по биохимии. М.: МГУ, 1989. 10. M.J. Qurbonov, Ch.E. Maxmadiyorova. Bioorganik kimyodan laboratoriya mashg‘ulotlari // O‘quv-uslubiy qo‘llanma. Qarshi, QarDU – 2010. 11. Кучеренко Н.Е. и др. Биохимия: Практикум // К.: Выща шк. Изд-во при Киев ун- те, 1988. -128 с. Mustaqil ta’lim uchun 1. Ю.С. Шабаров, Т.С. Орецкая, П.В. Сергиев. Моно- и дисахариды. // Учебное пособие для студентов III курса. Изд. 5-е, исправленное и дополненное. Часть I и II. Москва- 2010. 2. Жамсаранова С.Д., Пластинина З.А. Сборник задач и упражнения по биологической химии. Изд. ВСГТУ-2006. 3. Лабзина Л.Я., Липатова Н.А., Атянина Т.Ф., Громова Е.В. Рабочая программа по биологической химии. Федеральное агентство по образованию ГОУВПО «Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева» . Саранск -2007 .

O‘ZBEKISTO N RESPUBLIKASI OLIY VA O‘RTA MAX SUS TA’LIM VAZIRLIGI SAMARQAN D DAVLAT UN IVERSITETI TFF KIMY O BO‘LIMI III KURS 30_ GURUH TALABASI ________________________________________________________ _____________ ning FA N I DA N I. Laborat oriy a ishlari II. Must aqil ishi - Case-st udy (Variant № 2 )BIOORGANIK KIMYO

Samarqand – 20 21

LABORATORIYA MASHG‘ULOTLARI I. MODUL. OQSILLAR KIMYOSI ................................................ OQSIL ERITMALARINI TAYYORLASH ....................................... 1. Rangli va cho‘ktirish reaksiyalari uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash 2. Tuzlanish va dializ uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash 3. Sut albumini eritmasini tayyorlash 4. O‘simlik oqsillarini ajratib olish 5. Tuxum albuminini tuz bilan cho‘ktirish orqali ajratib olish 6. Qoramol sutidan kazienni ajratish 7 . Mushak to‘qimalaridan oqsillarni ajratish OQSILLARNI TOZALASH ........................................................... 1. Oqsillarni dializ usulida tozalash OQSILLARNING DENATURA T SIYASI ........................................ 1 . Oqsillarning denaturatsiyasini o‘rganish 2. Ammoniy sulfat bilan cho‘ktirish 3. Osh tuzi bilan cho‘ktirish 4. Oqsillarni organik erituvchilar yordamida cho‘ktirish 5. Oqsillarni yuqori harorat ta’sirida cho‘kmaga tushirish 6. Oqsillarni organik va mineral kislotalar ta’sirida cho‘ktirish 7. Oqsillarni og‘ir metall tuzlari yordamida cho‘ktirish 8. Oqsillarni alkaloidlar ga xos reaksiyalar yordamida cho‘ktirish 9 . Tuxum albuminining izoelektrik nuqtasini aniqlash OQSIL VA AMINOKISLOTALARGA XOS RANGLI REAKSIYALAR 1 . Biuret reaksiyasi 2. Ningidrin reaksiyasi 3. Ksantoprotein reaksiyasi 4. Fol reaksiyasi 5. Milon reaksiyasi 6. Metioninga nitroprussid reaksiyasi 7. Argininga Sakagu ch i reaksiyasi 8. Triptofanga Adamkevich reaksiyasi 9. Gistidinga Pauli reaksiyasi 10. Aminokislotalarni qog‘oz xromatografiyasi yordamida ajratish 11. Oqsil miqdorini L o uri usulida miqdoriy aniqlash MURAKKAB OQSILLAR .............................................................. 1. So‘lak tarkibidagi mutsinni aniqlash 2. Gemoglobining gemin guruhini uchun sifat reaksiya II. MODUL. UGLEVODLAR KIMYOSI ......................................... UGLEVODLARNI AJRATIB OLISH .............................................. 1. Uglevodlarni quruq mevalar (mayiz, turshak, meva qoqilari) dan ajratib olish 2. Saxarozaning gidrolizi MONOSAXARIDLARGA XOS SIFAT REAKSIYALARI .................. 1. Uglevodlarni α –naftol yordamida aniqlash 2. Fruktozani rezorsin (Selivanov usuli) yordamida aniqlash 3. Pentozalarni orsin yordamida aniqlash

4. Dezoksiribozani difenilamin yordamida aniqlash 5. Nilander reaksiyasi 6. Barfed reaksiyasi 7. Feling reaksiyasi 8. Polisaxaridlarga xos rangli reaksiyalar 9. O‘simliklarning yashil barglaridagi kraxmalni aniqlash 10. Piyoz ekstraktidagi glukoza va boshqa qaytaruvchi shakarlarni aniqlash 11. Kraxmalni miqdoriy aniqlash III. MODUL. NUKLEIN KISLOTALAR KIMYOSI ......................... NUKLEOPROTEIDLARNI AJRATIB OLISH VA GIDROLIZ REAKSIYALARINI O‘RGANISH ................................................. 1. Achitqidan nukleoproteidlarni ajratib olish va gidrolizlash 2. O‘simlik to‘qimalaridan DNK ni ajratib olish 3. Buqoq bezi yoki qora taloq, to‘qima dezoksiribonukleoprotei d ini ajratish NUKLEIN KISLOTALARNI SIFAT VA MIQDORIY ANIQLASH ..... 1. Hayvon to‘qimalaridagi DNK miqdorini aniqlash 2. DNK ning nukleotid tarkibini aniqlash 3. DNK mi q dor i ni kolorimetrik usul bilan aniqlash 4. Kolorimetrik usul bilan RNK miqdorini aniqlash IV. MODUL. LIPIDLAR KIMYOSI ............................................... YOG‘LARNI AJRATIB OLISH ...................................................... 1. Biologik suyuqliklardan yog‘ ajratib olish 2. Yog‘larning sovunlanishi va yog‘ kislotalari olish 3. Yog‘larning eruvchanligini aniqlash 4. Yog‘larni emulsiya holatiga o‘tkazish 5 . Yog‘lardagi glitsirenga xos reaksiya YOG‘LARNING ASOSIY SIFAT KO‘RSATKICHLARINI ANIQLASH …………………………………………………………………. 1. Yog‘larning to‘yinganlik darajasini aniqlash 2. Yog‘larning kislota sonini aniqlash 3. Yog‘larning sovunlanish sonini aniqlash TAVSIYA ETILADIGAN ADABIYOTLAR ......................................

I. MODUL. OQSILLAR KIMYOSI OQSILLARNI TABIIY MANBALARDAN AJRATIB OLISH OQSIL ERITMALARINI TAYYORLASH VA TOZALASH 1. Rangli va cho‘ktirish reaksiyalari uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum, distillangan suv, tubi yassi kolbalar, o‘lchov silindrlari yoki stakanlari, bint (doka, surp). Bitta tovuq tuxumining oqi sarig‘idan ajratiladi va 15-20 barobar ko‘p miqdordagi (ta x minan, 500 ml) distillangan suvda eritiladi. Eritma 3-4 qavat qilingan doka ( surp ) dan fil’trlanadi. Tayyorlangan eritma muzlatgichda saqlanadi. Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 2. Tuzlanish va dializ uchun tuxum oqsili eritmasini tayyorlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: tuxum, distillangan suv, osh tuzining to‘yingan eritmasi, tubi yassi kolbalar, o‘lchov silindrlari yoki stakanlari, bint (surp). Uch dona tovuq tuxumi sarig‘idan ajratiladi va 700 ml distillangan suvda eritiladi va ustiga 300 ml osh tuzining to‘yingan eritmasi quyiladi. Eritma 3-4 qavat qilingan doka ( surp ) dan fil’trlanadi. Tayyorlangan eritma muzlatgich da saqlanadi.  Xulosa. . …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………………………… ………… 3. Sut albumini eritmasini tayyorlash Kerakli reaktivlar va jihozlar: qoramol suti, distillangan suv, ammoniy sulfatning to‘yingan eritmasi, tubi yassi kolbalar, o‘lchov silindrlari yoki stakanlari, bint (doka, surp), qog‘oz fil’trlar.

Похожие

Programmmalash asoslari fanidan LAB
Dasturlash asoslari lab
Programmmalash asoslari lab
Elektron hukumat asosolari lab
NALITIK KIMYO FANI, TADQIQOT DOIRASI, MAQSADI